免费论文摘要：RNA干预控制的肉桂酰辅酶A恢复酶和咖啡茶酸变化酶恢复酶对丹参木质素堆积及水溶性次生新陈代谢物感化

丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）是一种在我国普遍散布的罕见药用植被，动作一种保守国药材，其药用部位重要为根。被普遍运用于心血管、月信不调以及百般炎症等病症的调节。按照药道学接洽，丹参的灵验因素重要分为两大类：一类为脂溶性的丹参酮类复合物，囊括丹参酮I、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酸甲酯、二氢丹参酮等；另一类为水溶性的酚酸类物资，囊括丹参素、紫草酸、丹酚酸以及迷迭香酸等。按照新颖药道学表白水溶性因素具备明显药理活性，同声保守用药多数沿用水煎法，连年来的热门已渐渐从对丹参脂溶性复合物的接洽变化到对丹参水溶性酚酸类物资的接洽上。已有试验表白，丹参中国水力电力对外公司溶性物资的合成与苯丙烷新陈代谢道路关系。本接洽采用苯丙烷类新陈代谢道路中的两个要害酶，肉桂酰辅酶A恢复酶（Cinnamoyl -CoA reductas, CCR）和咖啡茶酸-3-O-甲基变化酶恢复酶（Caffeic acid O-methyltransferase, COMT），对其沿用RNAi的本领接洽其功效，发端商量CCR基因和COMT基因与丹参次生新陈代谢物与木质素合成之间的联系，为证明丹参水溶性因素合成道路供给按照，同声，为进一步运用基因工程变革丹参种类、普及丹参灵验因素的含量等奠定普通。重要的接洽本领和截止如次：1. 采用CCR基因和COMT基因上一段长为296bp和340bp的片断动作靶片断，建立了丹参CCR基因和COMT基因的RNAi载体pPART27/CCR, pPART27/COMT。运用农杆菌介导的叶盘变化法，将载体pPART27/CCR, pPART27/COMT转入丹参中，经50mg/L卡那霉素挑选以及PCR检验和测定赢得了18株和21株阴性转基因株系。2. 对阴性转基因植株的表型举行了查看，用间苯三酚对转基因植株的茎切片举行染色，与比较植株比拟，转基因植株香港中华总商会木质素的含量展现为各别水平的低沉。用KMnO4对干预体植株的茎切片举行染色，查看S-型木质素含量的变革情景，截止表白，大普遍转基因植株的S-型木质素含量略有低沉。3. 用GC-MS领会CCR和COMT干预体中，木质素单体含量的变革。截止表白，各别的阴性株系中，木质素单体的含量均有各别水平的下调。4. 用Gravimetric methods, Klason lignin本领对阴性植株中的总木质素含量举行检验和测定，同时间别检验和测定克拉森木质素含量和酸可溶性木质素的含量。截止表露，CCR中克拉森木质素含量贬低，酸可溶性木质素含量飞腾；COMT中，卡拉森木质素含量有所低沉，而酸可溶性木质素中，大局部飞腾，小局部低沉，展现为不普遍性，大概与基因表白量关系。5. 对转基因株系中的水溶性酚酸类物资举行了HPLC领会，将CCR, COMT的根和叶辨别与比较植株比拟较，其截止展示不普遍性。

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