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多巴胺是一种要害的神经递质,接洽表白该神经递质与底栖生物的很多心理震动出色关系,也与很多众生的发育和动作相关。多巴胺及多巴胺转运体与很多神经性病症生存确定关系性。多巴胺心理功效的运用,受多巴胺受体安排,同声还受多巴胺转运体的安排,多巴胺转运体调节和控制道路是其余安排办法不行代替的。本接洽以拟黑多刺蚁为试验资料,沿用RT-PCR和RACE本领克隆多巴胺转运体基因,沿用荧光及时定量PCR本领发端商量该基因在拟黑多刺蚁各别等第和各别发育阶段的mRNA程度表白情景。接洽截止如次:1、拟黑多刺蚁多巴胺转运体基因cDNA序列全长2520bp,囊括源代码634氨基酸酸残基,长度为1905bp的源代码区,5’非源代码区365bp,3’非源代码区250bp。同源探求表露,与虫豸多巴胺转运体卵白一致度较高,更加是与意大利蜜蜂同源性到达87%。决定所得序名列拟黑多刺蚁多巴胺转运体基因全长,定名为Pvdat,序列上传至NCBI 中GenBank数据库,获得序列号HQ898856。2、底栖生物消息学领会Pvdat基因序列及源代码卵白。猜测氨基酸酸序列表白该基因源代码634个氨基酸酸残基的卵白质。同源性领会表露,猜测到的卵白同源性较高,和虫豸已创造的DAT一致度均在80%之上。体例进化领会PvDAT,创造该卵白具备较好顽固性,属于Na/Cl离子依附性转运体家属。所建体例进化树意大利蜜蜂和拟黑多刺蚁隔绝迩来,鲜明聚为一支。猜测创造PvDAT无O糖基化位点,但有2个N糖基化位点和多个盐酸化位点。PvDAT分子量71650.3Da,表面等电点6.06,属于亲脂性极性卵白。具备14个跨膜地区,N端含有旗号肽序列。二级构造猜测创造,PvDAT是由多电钻、折叠和弯曲构造的搀和型卵白。三级猜测揭穿该卵白含有膜贯串构造,有分子辨别功效。3、采用拟黑多刺蚁各别等第和各别发育阶段虫体,荧光及时定量RT-PCR检验和测定Pvdat基因mRNA程度表白情景。截止表露,在拟黑多刺蚁所有发育阶段该基因mRNA均有表白,但卵期高于毛蚴期和蛹期,毛蚴期以三龄毛蚴为最低。Pvdat 的mRNA表白在毛蚴发育中低于卵期,分别提醒该基因大概对卵的发育感化比毛蚴发育的高。各别等第中兵蚁、雌蚁和雄蚁均有表白且普遍高于卵期,兵蚁表白量最高到达卵期的2.5倍;脱翅前雌蚁和脱翅后比拟,脱翅后表白量展示鲜明低沉;脱翅前雌蚁和兵蚁比拟,mRNA程度表白量不十分,有明显分别(P)。兵蚁搀杂的社会动作与其多巴胺转运体基因转录程度相普遍,雌蚁和雄蚁该基因转录程度与这两个等第的生殖动作出色接洽。Pvdat的mRNA在拟黑多刺蚁各别等第和各别发育阶段表白分别,提醒Pvdat基因表白与卵的发育及拟黑多刺蚁生殖和社会性动作关系联,大概与等第分裂相关。
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