免费论文摘要：辛基酚对华夏林蛙精巢中P450c17(CYP17)表白的感化

摘? 要跟着产业化的兴盛，情况内渗透干预物（environmental endocrine disrupting chemicals, EDCs）连接地被开释到情况中，经过茶饭、交战等道路加入肌体, 对生人及野生底栖生物的存在爆发宏大感化。辛基酚（octylphenol, OP）是一种要害的酚类情况雌荷尔蒙，普遍生存于水体、泥土和凡是耗费品中，其雌荷尔蒙活性大概是雌二醇的10-4倍。试验已表明OP可引导精虫品质和数目低沉，性荷尔蒙水宽厚性动作特殊，感化雄性生养本领。细胞色素P450c17（CYP17）是类固醇合成道路中的要害酶，在精巢细胞中与睾酮的合成出色关系。相关OP干预P450c17的接洽已有通讯，但相关两栖众生水域OP表露能否感化 P450c17 mRNA和卵白的表白仍未见通讯，本试验经过将雄性华夏林蛙（Rana chensinensis）表露于含OP的水体中，检验和测定精巢Leydig细胞中P450c17 mRNA 和卵白的表白程度，商量OP感化类固醇荷尔蒙合成的体制，为酚类情况传染物的处置供给按照。? 本试验将雄性华夏林蛙表露于10-6、10-7、10-8mol/L OP中10、20、30和40 d，10-7、10-8 mol/L E2动作阴性比较；取其精巢，用免疫性构造化学本领检验和测定P450c17卵白在Leydig细胞中的表白，用原位杂交和荧光及时定量的本领对CYP17 mRNA举行定位和定量领会，试验截止如次：1. 从雄性华夏林蛙精巢中胜利索取总RNA，OD值（260nm/280nm比值）在1.7-2.0之间。胜利克隆出300bp的局部CYP17片断（序列号HQ610611），该片断序列与东北林蛙（Rana dybowskii）的一致性为97%，与粗皮蛙（Rana rugosa）的一致性为97%，与润滑爪蟾（Xenopus laevis）的一致性为96%。用所得片断序列安排合成原位杂交探针。2. 原位杂交试验截止表露，CYP17mRNA阴性反馈产品重要生存于Leydig细胞中，Sertoli细胞和生精致胞中也有所表白。免疫性构造化学定位检验和测定与原位杂交截止基础普遍。3. 免疫性构造化学阴性反馈产品的光密度检验和测定表露：表露10d，与比较组比拟，各OP浓淡组的P450c17卵白表白分别不明显（p>0.05）；表露20、30d，与比较组比拟，10-6、10-7mol/L OP组的表白对立值低沉明显（p）；10-7、10-8mol/L OP组的表白对立值高于10-6mol/L OP组（p），10-8mol/L OP组与10-7mol/L OP组分别不明显（p>0.05）；表露40d，与比较组比拟，10-6、10-7mol/L OP组的表白对立值低沉明显（p），10-8mol/L OP组与10-7mol/L OP组比拟，10-7mol/L OP组与10-6mol/L OP组比拟，分别均不明显（p>0.05）。比拟同一OP浓淡的各别表露功夫，在10-6mol/L OP处置组中，表露20d的P450c17卵白表白对立值低于10d，表露30d低于20d，分别均明显（p）；在10-7mol/L OP处置组中，表露20d低于10d（p），表露30d与20d分别不明显（p>0.05）；在10-8mol/L OP处置组中，表露20d与10d比拟，30d与20d比拟分别均不明显（p>0.05）。上述表露，经OP表露后，P450c17卵白的表白值可爆发下调，且随OP表露浓淡的升高和表露功夫的延迟呈低沉趋向，表露出剂量效力和功夫延迟效力。表露30d的P450c17卵白表白值最低，表露40d，各浓淡组之间的表白分别不明显，即剂量效力被功夫积聚效力所缩小。4. 荧光及时定量PCR对CYP17 mRNA表白的检验和测定表露：OP表露10、20d，与比较组比拟，各OP浓淡组的CYP17 mRNA表白对立值分别极明显（p），个中10-7、10-8mol/L OP组高于10-6mol/L OP组（p），10-8 mol/L OP组与10-7mol/L OP组比拟分别不明显（p>0.05）；表露30、40d，与比较组比拟，各OP浓淡组的CYP17 mRNA表白对立值分别极明显（p），10-8mol/L OP组与10-7mol/L OP组比拟，10-7mol/L OP组与10-6mol/L OP组比拟分别均不明显（p>0.05）。比拟同一OP浓淡的各别表露功夫，在10-6mol/L OP组，表露20d，CYP17 mRNA的表白对立值低于10d（p），30d与20d的分别不明显（p>0.05）；在10-7、10-8mol/L OP组，表露20d与10d比拟，表露30d与20d比拟分别均不明显（p>0.05）。看来OP可下调CYP17 mRNA的表白，并且随OP表露浓淡的升高和表露功夫的延迟呈低沉趋向，同P450c17卵白的表白趋向基础普遍。但CYP17 mRNA的表白的最低值在表露20d到30d之间，比P450c17卵白表白的最低值展示功夫偏早。?要害词：华夏林蛙，细胞色素P450c17，辛基酚，间质细胞

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