论文摘要：银线草指纹图谱及化学成分的研究

银线草（Chloranthus japonicus Sieb.）为金粟兰科金粟兰属多年生的草本植物，主产于中国的黑龙江、辽宁、吉林、陕西、山西和甘肃等省，以根或者全草入药，在民间是治疗跌打损伤、瘀血肿痛、风湿痛、毒蛇咬伤、疖疮肿毒的良药，具有很高的药用价值。目前有关银线草的成分分离鉴定、药理学等方面已有报道，但对质量控制方面少有研究，限制了对它们的开发与利用。
本研究是在前人和本课题组研究的基础上，采用了HPLC法对产自辽宁、吉林、黑龙江和陕西省的13批次银线草指纹图谱进行探讨，建立银线草甲醇提取物的指纹图谱，以揭示其化学成分的差异，为银线草质量标准的制定提供科学依据。同时本实验通过LC-MS联用技术对其化学成分进行鉴定，并测定不同部位、不同采收季节银线草中酚酸类和香豆素类物质的含量，为银线草全株合理的利用和适时的采收提供参考。
本实验的主要结果如下：
（1）银线草的提取条件为：银线草粉末1g，加入70%甲醇5mL，提取2次，合并提取液，摇匀，过0.22μm微孔滤膜。最佳色谱条件为：采用Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相：A甲酸水，B甲醇；梯度洗脱的条件：0～5 min，甲醇15%～25%；5～20 min，甲醇25%～30%；20～45 min，甲醇30%～40%；45～95 min，甲醇40%～60%。流速0.8mL/min；检测波长323nm；柱温25℃；记录时间95min；进样量10μL。
（2）构建了陕西、黑龙江、吉林和辽宁四个主产区的13批银线草的指纹图谱，以迷迭香酸为参照峰，从13批银线草的特征峰中确定了12个共有峰，对13批次的银线草指纹图谱进行相似度进计算，发现不同产地银线草的指纹图谱存在一定的差异，通过对共有峰的相对峰面积进行聚类分析，将这13批银线草样品大致分为2类。通过考察银线草指纹图谱的稳定性、重现性和精密度，得到主要峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD值均小于3%，说明建立的银线草指纹图谱方法可行、系统稳定，符合中药指纹图谱建立的要求，为银线草质量标准的建立提供了一定的参考。
（3）运用液质联用技术对反丁烯二酸、异秦皮啶、绿原酸和迷迭香酸的结构进行了初步表征及含量的测定。结果表明银线草中的异秦皮啶主要存在于银线草的根中，且根中的含量高于《中国药典》（2010）版规定的金粟兰科草珊瑚属肿节风药材的异秦皮啶含量0.02%。反丁烯二酸主要存在于茎和叶中，4、5月份的含量高于6、7月份；绿原酸则主要存在于叶中，4-6月份叶里的含量远高于根和茎中，其中4月份含量最高；迷迭香酸主要存在于叶中，5-7月份叶里的含量远高于茎和根中，其中5月份含量最高，超过《中国药典》（2010）版规定的金粟兰科草珊瑚属肿节风药材中的迷迭香酸含量0.02%。

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