摘要：林蛙接触辛基酚后肝脏差异表达基因的筛选与分析

烷基酚类复合物（alkylphenols，APEs）属于情况内渗透干预物（Endocrine  disrup tive chemicals，EDCs），其衍底栖生物辛基酚（4-tert-Octylphenol，OP）是一种化学本质宁静的亲脂性物资，具备雌荷尔蒙效力、毒性效力及致癌效力。控制消减杂交本领（suppression subtractive hybridization，SSH）是在转录程度上接洽基因分别表白的本领，具备高奇异性、高精巧性和高功效等便宜，可动作挑选分别表白基因的本领。本接洽以华夏林蛙（Rana chensinensis）为东西，用SSH建立OP表露后华夏林蛙肝脏分别表白基因的差减cDNA文库，挑选其分别表白基因，并对已获得基因举行分门别类和功效解释，从基因表白程度、基因间彼此效率观点商量APEs对众生肝构造的毒性效力体制。本试验的重要截止和论断如次：1. 索取了比较组和OP处置组林蛙肝构造的总RNA后，用凝胶电泳和核酸领会仪检验和测定截止, rRNA的三条带明显，mRNA条带的散布表露弥漫状，所索取RNA的OD260/ OD280比值在1.8-2.0之间，表白索取的RNA品质适合建立cDNA差减文库的诉求。以OP表露后林蛙的肝构造cDNA为检验和测定子（tester），以空缺比较的肝构造cDNA为启动子（driver），胜利建立OP表露后华夏林蛙肝脏分别表白基因的差减cDNA文库。2. 对测序获得的131个表白序列标签（EST）经去除载体序列后，经过NCBI比对东西举行序列同源性领会表白，在建立的OP表露后林蛙肝脏分别表白基因的差减cDNA文库中，与已知基因序列一致性在50%之上的EST序列有75个，占测序截止的57%，与已知基因序列一致性在50%以次的EST序列有56个，占测序截止的43%。表白在华夏林蛙仍生存很多有待于深刻接洽的基因，大概是林蛙肝构造表白的基因与已知基因序列的物种比拟其同源性较低。3. 用及时定量RT-PCR对文库中的血纯洁卵白基因和纤维卵白原γ基因表白举行定量领会，截止表露，与比较组比拟，血纯洁卵白和纤维卵白原γ mRNA在OP处置后肝构造的对立表白量明显增高，血纯洁卵白基因的高表白引导血纯洁卵白合成量的减少，与进一步巩固对OP的解毒功效相符合。纤维卵白原γ基因的高表白大概是肌体对OP爆发的应激反馈，惹起肝构造慢性期反馈体例关系基因的表白。这个截止同声也表白本试验建立的肝构造控制差减文库是胜利的。4. 对cDNA文库中赢得的已知基因举行功效分门别类，创造介入细胞物资转运和细胞旗号转导的基因各占13%，介入细胞免疫性、细胞构造和物资新陈代谢的基因各占10%，介入细胞转录调节和控制的基因占7%，介入细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期、细胞分裂的基因各占3%，其他约有25%的基因功效仍不领会。截止表白OP表露引导林蛙的肝构造中分别表白的基因重要波及细胞物资转运、细胞旗号转导、细胞免疫性、细胞构造和物资新陈代谢等上面的功效。

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