摘要：棉花子叶瞬时表达系统的建立与应用

摘 要?棉花是锦葵科棉属植被的健将纤维，原产于亚热带，是寰球上最重要的财经农作物之一。棉花基因组测序暂时仍旧实行，对棉花中功效基因的接洽也加入到更深更广的阶段。为了更好的接洽棉花基因的功效，须要运用转基因的本领举行基因功效领会，但棉花的遗传变化试验周期长，须要奢侈洪量的人工、物力，而且变化率低。而用刹时变化本领可简单、赶快的考证启用子活性，卵白质与卵白质互作，亚细胞定位等，无助于于赶快领会棉花根源的基因功效。正文采用棉花完全叶动作试验资料，运用GUS表白载体及农杆菌打针的本领创造了棉花完全叶刹时表白体例；经过正交试验对变化的农杆菌菌株、打针菌液浓淡、共培植天数、苗龄和打针量举行了优化。在此普通上运用棉花完全叶刹时表白体例对棉花中克隆的开辟型启用子D-7的活性举行了领会，对Ghppr1和GhpprH2的亚细胞定位举行了接洽，博得的截止如次：1、运用棉花完全叶动作试验资料，经过农杆菌介导的本领将含gus基因的表白载体打针到完全叶中，检验和测定GUS表白。正交试验获得的截止表露：萌生6天的棉花完全叶打针50µl OD600为0.5的含gus基因的农杆菌，共培植2-3天后，外源基因表白功效最高。2、棉花完全叶比真叶更符合做外源基因的刹时表白接洽，农杆菌LBA4404介导的变化功效优于GV3101。此本领从棉花萌生到截止察看，仅需8—12天功夫，且操纵大略易行，在棉花基因功效的接洽上面有较好的运用价格。3、以eGFP为汇报基因，运用棉花完全叶刹时表白体例对D-7启用子活性举行领会，截止表露D-7启用子是一个弱的威吓开辟型启用子，受干旱、盐、ABA、高温、低温处置6-9h时，有绿色荧光表白，与D-7-eGFP变化拟南芥的试验截止有普遍性。表白棉花完全叶刹时表白体例可用来棉花根源的启用子活性接洽，强启用子的功效更宜于查看检验和测定。4、底栖生物消息学领会表露GhPPR1基因大概有细胞审定位旗号。运用PCR本领从Ghppr1扩大与增加获得一段长度为1875bp的基因序列，定名为Ghppr1-p。运用pEASYTM-T5 Zero、PZP211和Ghppr7spE载体，建立了CaMV35S启用子启动的Ghppr1-p与eGFP融洽的植被表白载体，定名为Ghppr1-eGFP。?5、以eGFP为汇报基因，运用棉花完全叶刹时表白体例及激光共聚焦显微镜查看Ghppr1和GhpprH2的亚细胞定位。截止表露：完全叶打针了含GhpprH2-eGFP载体的农杆菌LBA4404，共培植3天后，在叶绿体中可查看到明显的绿色荧光，表白GhpprH2定坐落叶绿体。

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