论文摘要：NF-κB, PKC, JNK信号通路对原型泡沫病毒启动子活性的影响

泡沫病毒的基因组结构，生活周期以及基因转录调控方式与其他的逆转录病
毒相比显示了明显的不同。同时由于其在体外能导致明显的致细胞病变效应与在
宿主体内形成持续性感染而无致病性这一矛盾，使得泡沫病毒越来越多的成为大
家的研究对象。泡沫病毒的基因转录调控至少由两个启动子参与，其中基因组 5’
端的长末端重复序列能够调节病毒的结构蛋白 Gag，Pol，Env 的表达，而在 env
基因的3’端的内部启动子能够调节非结构蛋白 Tas和 bet 的表达。同时，有研究发
现在非洲绿猴泡沫病毒 SFV-3 的 gag 基因的 3’端有一段约 40bp 的序列能够和 Tas
蛋白结合并且能够被Tas蛋白所激活。对病毒非结构蛋白的研究发现，Tas蛋白能
够和细胞内的其他蛋白发生作用，影响细胞的生命活动，同时对病毒的复制增殖
产生影响。另一方面，泡沫病毒感染细胞后，宿主的免疫系统会做出相应的反应
来应对病毒的入侵，在这个过程中，细胞内许多信号通路及其中间蛋白都会发生
相应的变化，例如 PKC，JNK，NF-κB 信号通路及两个重要的中间蛋白 AP-1 和
BAG3。
为了进一步明确Tas蛋白对泡沫病毒启动子的调控作用，以及细胞内信号通路
对泡沫病毒复制的影响，本研究以原型泡沫病毒（prototype foamy virus, PFV）为
对象，展开了以下的研究内容：
（1）原型泡沫病毒反式作用因子 Tas 蛋白对不同长度 LTR 和 IP 启动子以及
GagP1序列的作用。
利用JASPAR,TFSEARCH等生物信息学软件对泡沫病毒的LTR，IP启动子和
GagP1序列进行了分析，找到了 LTR和IP启动子上与PKC，NF-κB，JNK信号通
路相关的转录因子的潜在作用位点，以及GagP1序列上的PKC信号通路相关的转
录因子潜在结合位点。以pHSRV13质粒为模板，构建了一系列不同长度的LTR和
IP 序列以及 GagP1 序列的荧光素酶报告基因载体。将所构建的荧光素酶报告基因
质粒与pCI-tas蛋白表达质粒进行了瞬时转染实验，结果表明：原型泡沫病毒LTR
上有三个TRE（Tas responsive element），缺失前两个时，启动子的基础活性和激
活活性均明显降低，说明这两个TRE在LTR 的活性中起着重要的作用；原型泡沫
病毒IP启动子8379-8927 nt 序列的缺失对启动子的激活活性影响较大，使用转录
因子分析软件 JASPAR 和 TFSEARCH 分析后发现在这段序列中存在一个 AP-1 的
结合位点，这个结合位点很有可能对IP启动子的活性起着重要的作用。
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（2）PKC，NF-κB，JNK 信号通路参与原型泡沫病毒 LTR，IP 启动子以及
GagP1序列的作用。
根据转录因子预测的结果，LTR 1-662 nt 之间可能存在潜在的NF-κB 和NFAT
结合位点，LTR 1-412 nt 之间可能存在AP-1结合位点。IP8379-8980 nt 之间可能存
在潜在的NF-κB 和NF-AT 的结合位点，IP 8379-9019 nt 之间存在潜在的AP-1的
结合位点。选择含 LTR(1-1121)，LTR(1-780)，LTR(412-780)，LTR(662-780)及
IP(8379-9195)， IP(8980-9195)以及IP(9019-9195)七个序列的荧光素酶报告基因载体
进行了信号通路实验。发现PKC，NF-κB，JNK信号通路参与了启动子活性调控。
（3） PKC信号通路中重要蛋白 AP-1以及NF-κB信号通路重要蛋白 BAG3对
LTR，IP启动子序列以及GagP1序列的作用。
构建了 AP-1 蛋白的两个亚基 FOS 和 JUN 蛋白的表达载体 pcDNA-FOS 以及
pcDNA-JUN，同时还构建了 BAG3 蛋白的表达载体 pcDNA-BAG3。选择
pGL3-LTR(1-1121)、pGL3-IP(8379-9438)、pGL3-GagP1 分别和 pcDNA-FOS，
pcDNA-JUN以及pcDNA-BAG3共转染，发现 AP-1对三个启动子序列都有较强的
激活作用，说明三个启动子上具有能够起正调控作用的 AP-1 的结合位点。AP-1
对启动子的基础活性起着重要的作用，但和 Tas 蛋白表达载体共转染后发现 AP-1
的存在对启动子的激活活性并不是必须的。适量BAG3蛋白存在的情况下，LTR，
IP启动子和GagP1序列的基础活性均有所上调，但Tas蛋白存在的情况下，BAG3
的作用受到限制。

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