论文摘要：灵芝多糖对SGC7901/ADR细胞多药耐药逆转作用研究

癌症是导致人类死亡的重要原因之一，发病率逐年上升，其中以化疗为主的综合治疗手段是当前治疗癌症的主要方式。而肿瘤化疗失败的主要原因就是肿瘤多药耐药(multidrug resistance, MDR)的产生。因此，寻找低毒且高效的肿瘤MDR逆转剂已经成为当今研究热点。本实验主要研究灵芝水溶性部位中灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLPS)和胆碱对胃癌耐药细胞株SGC7901/ ADR多药耐药的逆转作用，并探讨其可能的逆转机制，为逆转肿瘤MDR提供一定的理论及实验依据。
实验方法：
⑴制备灵芝水溶性部位。并用苯酚-硫酸法及雷氏铵盐法分别测定了灵芝水溶性部位中GLPS及胆碱的含量。
⑵利用MTT法检测GLPS和胆碱对人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR的细胞毒作用，计算IC20及IC50值，选取对SGC7901/ADR细胞抑制率≦20%的GLPS及胆碱浓度作为无毒性剂量用于今后实验。
⑶利用MTT法检测GLPS和胆碱分别与阿霉素(adriamycin, ADR)联合作用后，两种药物对SGC7901/ADR细胞的逆转作用并计算逆转倍数。
⑷利用流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测了分别用GLPS和胆碱处理后SGC7901/ADR细胞中的ADR及罗丹明123(Rhodamine-123,Rho123)的含量，计算荧光蓄积倍数。
⑸利用RT-PCR技术检测了GLPS及胆碱处理后SGC7901/ADR细胞中编码P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的基因MDR1的表达水平。
实验结果：
⑴定量测定结果表明，灵芝水溶性部位中GLPS的含量为12.61%，而胆碱的含量为5.98%。
⑵MTT结果表明，GLPS和胆碱对SGC7901/ADR细胞的IC50值分别为：8669.00µg/mL 和 792.52µg/mL。而GLPS和胆碱的IC20值分别为403.23µg/mL 和106.71µg/mL。
⑶逆转实验结果表明，用非毒性剂量下不同浓度的GLPS和胆碱处理SGC7901/ADR细胞48h，SGC7901/ADR细胞的IC50值均下降，在一定程度上呈现剂量依赖性。GLPS的逆转倍数为3.25-5.65之间，而胆碱逆转倍数为1.42-3.03之间。GLPS的逆转效果优于胆碱逆转效果。
⑷流式细胞仪结果提示GLPS和胆碱处理SGC7901/ADR细胞后，细胞内Rho123及ADR平均荧光强度(the intracellular mean fluorescence intensity, MFI)均增加，Rho123外排减少，表明GLPS可通过增加药物蓄积及减少药物外排从而增加细胞内药物浓度，逆转肿瘤MDR。胆碱也具有微弱的逆转肿瘤MDR的效果。
⑸RT-PCR结果提示，用GLPS处理SGC7901/ADR细胞后，与对照组相比MDR1基因的表达量下降。提示GLPS可通过下调MDR1基因的转录来逆转肿瘤MDR，而胆碱处理后，SGC7901/ADR细胞内MDR1基因表达水平并未降低，表明胆碱逆转肿瘤MDR的机制与P-gp不相关，其具体机制有待进一步的探索。
结论：GLPS和胆碱均具有逆转肿瘤MDR的作用。但GLPS的逆转效果明显优于胆碱。GLPS逆转机制可能是：GLPS可使MDR1基因转录水平下降，影响P-gp表达水平，或者通过抑制药物外排及增加药物蓄积等途径增加细胞内抗癌药物浓度，逆转耐药。而胆碱逆转MDR的机制与P-gp无关。GLPS由于毒性较低，且逆转效果较好，所以GLPS或许是灵芝水溶性部位中逆转肿瘤MDR的一个有效成分，具有很大的开发及研究价值。

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