免费论文摘要：华夏林蛙Dmrt1基因表白形式及辛基酚（OP）对精巢Dmrt1 mRNA的感化接洽

　　　本接洽克隆了华夏林蛙（Rana Chensinensis）Dmrt1 (double-sex and mab-3 related transcription factor 1)基因，并检验和测定了该基因在华夏林蛙成体各别构造的表白以及在精巢中的定位。而后，将林蛙表露于各别浓淡的辛基酚（octylphenol，OP，10-8,10-7,10-6,10-5mol/L）后，检验和测定精巢中Dmrt1 mRNA 的表白变革，商量OP对Dmrt1基因表白的感化，领会Dmrt1大概的心理功效。沿用回转录会合酶链式反馈（RT-PCR）和cDNA拼接本领，克隆华夏林蛙Dmrt1基因，对其所源代码的氨基酸酸序列消息，进化联系，卵白质生化本质,二三级构造,亲水/疏水性，跨膜构造，旗号肽，细胞定位举行领会。经过RT-PCR领会Dmrt1在成体精巢、卵巢、肝脏、肾脏和脑构造中的散布；对母体性腺中肾复合体（GMC）中Dmrt1的表白变革也用RT-PCR举行领会；牝牡基因组中Dmrt1程度的分别用PCR本领举行大略评价。用荧光及时定量PCR检验和测定各别OP浓淡和各别表露功夫对Dmrt1 mRNA表白的感化；用原位杂交本领检验和测定Dmrt1 mRNA在精巢中的场所。重要试验截止和论断如次：　　　华夏林蛙的Dmrt1 cDNA全长1118 bp，个中1005 bp的盛开观赏框可源代码334个氨基酸酸。与其它脊椎众生的Dmrt1氨基酸酸序列比对，华夏林蛙的Dmrt1序列与粗皮蛙的一致性为97%，与黑斑侧褶蛙为95%，具备很高的一致性。个中DM顽固域、雄性一定域和P/S域一致度也很高。　　　华夏林蛙的Dmrt1卵白头等构造领会表露，对立分子量为36750.0Da，表面等电点PI为8.45，碱性氨基酸酸（Asp+Glu）28个，碱性氨基酸酸（Lys+Asp+His） 39个，分子式为C1582H2467N451O513S23，消光系数为40340，半衰期为30h，不宁静系数为61.89，脂肪族指数和亲水性平衡系数辨别为52.57和-0.656。二级构造领会表露，该卵白是包括α-电钻，无规弯曲和蔓延链的搀和型卵白。三级构造领会截止表露与该卵白质最配合的沙盘是1lpvA，最好比对地区坐落Dmrt1卵白序列的第26-74位氨基酸酸残基，序列普遍性达64%，e值为5.84e-12,该卵白质DM域包括一个锌指构造。亲水疏水性领会，跨膜领会，旗号肽领会和细胞定位领会表露该卵白属于亲水性卵白质（与生化本质领会截止普遍），无跨膜区，且其有大概是坐落线粒脑细胞核的DNA贯串卵白（非组卵白）。　　　RT-PCR截止表露，Dmrt1仅在雄性成体的精巢和肾脏中表白，且精巢中Dmrt1表白量比肾脏高。华夏林蛙雌、雄两性的基因组中Dmrt1基因正片数基础普遍，表白Dmrt1基因在牝牡华夏林蛙基因组中不具性别二态性。　　　Dmrt1在G30-G36期华夏林蛙蝌蚪的性腺中肾复合体（gonad-mesonephros complex, GMC）中被检验和测定到，尔后在蝌蚪未被检验和测定到。表白Dmrt1大概在性腺分裂中起要害效率。　　　原位杂交截止表露，雄性成体的Dmrt1 mRNA重要定坐落精巢间质细胞，扶助细胞和局部生精致胞。　　　将林蛙表露于各别浓淡的OP水体后，用qRT-PCR检验和测定Dmrt1 mRNA 在精巢中的表白。与空缺组比拟，在表露10d，除10-8 mol/l OP组外，各OP处置组的Dmrt1 mRNA明显低沉（p

来源：半壳优胜育转载请保留出处和链接！

本文链接：http://87cpy.com/215744.html