免费论文摘要：拟南芥AT2G17350基因功效的发端接洽

拟南芥是十字花科拟南芥属的一种果本植被，它普遍散布于寰球各地。动作形式植被其基因组测序早已颁布，但仍有洪量的基因功效未知。本接洽重要从反向遗传学观点对未知基因AT2G17350的功效举行发端的商量。领会该基因在各别前提下转录水宽厚卵白程度的表白情景，以估计该基因大概具备的底栖生物学功效，为进一步的试验接洽奠定普通。本接洽的重要实质和截止如次：1. 沿用及时荧光定量qRT-PCR本领对AT2G17350举行基因表白领会：检验和测定AT2G17350基因辨别在低温、高温、短功夫脱水和外源荷尔蒙ABA、 GA_3、MeJA处置前提下的表白情景。截止表露AT2G17350基因对低温、高温、短功夫脱水处置都展现出应激反馈；在外源荷尔蒙的开辟下，该基因表白量明显上调。发端估计AT2G17350基因相应植被的威吓开辟，大概在植被的成长发育进程中起着要害的效率。2. 对AT2G17350基因举行底栖生物消息学领会，猜测获得四个大概与其互作的卵白，它们辨别为AT3G25980 ( MAD2，有丝分割纺锤体检查点卵白)、AT5G65940 ( CHY，一种具备水解酶活性的过氧化学物理酶卵白，对脂肪酸的推陈出新起着要害的效率) 、AT4G16143 ( IMPA-2，一种胞内转运卵白) 、AT4G02150 ( IMPA-3，一种介入卵白转运和绑定的卵白，并相应威吓)。这四种卵白在底栖生物进程中都表现着要害的效率，而且它们之间不生存共表白的联系。克隆创造CHY 、IMPA-2和IMPA-3这三条基因除去Tair网站颁布的已有剪切办法外，均还生存更多的剪切办法。个中CHY和IMPA-2还生存5种剪切情势，IMPA-3也还生存另一种剪切办法。3. 运用酵母双杂交本领接洽卵白的彼此效率，截止表白AT2G17350卵白与MAD2、IMPA-2、IMPA-3 卵白具备彼此效率。同声建立了原核表白载体，沿用GST-Pull down的本领对酵母双杂交截止举行全党外考证。进一步证领会AT2G17350与MAD2具备彼此效率，估计AT2G17350大概介入细胞有丝分割进程。4. 贯串AT2G17350干预、过表白植株和MAD2、CHY 、IMPA-2、IMPA-3的渐变体植株，应用qRT-PCR对这五条基因的彼此联系进一步接洽。截止表白：①五条基因在花、果荚、枝杈和莲座叶中均有表白，个中在花和果荚中表白量都明显上调，表白形式基础普遍。②AT2G17350在其它四条基因的渐变体中表白量都明显上调，表白当其余基因缺失机，AT2G17350大概表现着一种积累效率。③MAD2在AT2G17350干预植株的果荚和AT2G17350渐变纯合体（HM）中表白量上调，过表白植株的果荚中下调，证明AT2G17350和MAD2大概生存一种拮抗联系。④从 IMPA-2和IMPA-3在AT2G17350的干预、过表白和HM植株中表白情景来看，AT2G17350与IMPA-2 和IMPA-2 关系性不大，简直的联系还需进一步接洽。5. 从文件中挑选获得7条有丝分割关系基因，辨别为MAD1、ATM、BRCA1、Bub3、cdc20、CDK和Mps1（均为有丝分割检查点的要害卵白，介入DNA的伤害应答）。在已有的植株中领会它们的表白量，截止表白那些基因在AT2G17350的干预和渐变纯合体HM植株中表白量都明显飞腾。证明AT2G17350表白的变革感化了那些基因的表白量，进一步估计AT2G17350基因在有丝分割进程中起着确定的效率，大概介入了DNA伤害和建设进程。本接洽在各别处置和开辟情景下检验和测定获得 AT2G17350 相应威吓开辟，介入植被的成长发育进程。经过酵母双杂交和 GST-Pull down 试验获得AT2G17350 和 MAD2 具备彼此效率，估计其大概在细胞有丝分割进程中起要害效率。领会上述四条基因和局部有丝分割基因在 AT2G17350 干预、过表白植株和 MAD2、CHY 、IMPA-2 、IMPA-3 渐变体植株中的表白形式，截止表白AT2G17350 和MAD2在基因表白程度上大概生存一种拮抗联系。而有丝分割关系基因的表白进一步指出AT2G17350大概介入了有丝分割进程中 DNA 伤害和建设。该截止为后期接洽未知基因 AT2G17350 的功效供给了参考目标和按照。

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