免费论文摘要：低氧应激下甘肃鼢鼠脑和肝中抗氧化酶的表白及GPx1基因克隆与底栖生物消息学领会

甘肃鼢鼠(Myospalax cansus)为我国私有营地下生存鼠类，因为地下洞道气体情况为典范的低氧、高中二年级氧化碳，长久的进化使其产生了一系列符合性体制，变成接洽低氧符合的理念众生。接洽表白，当肌体居于低氧情况时，一系列的应激反馈会引导活性氧自在基(R0S)的增加，使肌体居于氧化应激状况，而抗氧化体例有废除自在基、保护氧化-抗氧化体制平稳等功效，是肌体内要害的氧化提防体例。超氧化学物理歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、谷胱甘肽过氧化学物理酶(glutathion Peroxidase, GPx)是底栖生物体内最要害的三大抗氧化酶系，个中，GPx亦属硒酶。相关地下鼠抗氧化体例在低氧符合中的体制接洽还不是很充溢。本接洽运用生去世学本领测酶活，比拟接洽甘肃鼢鼠和SD大鼠在常氧、慢性低氧和耐性低氧前提下脑和肝构造中SOD、CAT、GPx三种抗氧化酶的活性，及构造的总抗氧化本领(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量；运用及时定量PCR本领，测定SOD1、CAT、GPx1三种抗氧化酶的mRNA表白量；运用RT-PCR本领克隆甘肃鼢鼠GPx1基因cDNA序列，并按照Gengank、PDB、Pfam、ExPASy、MART、ConSurf等数据库消息，对核苷酸序列和氨基酸酸序列举行同源建立模型、构造比对、功效位点、体例进化树、采用压力等底栖生物消息学领会。以此商量抗氧化酶在肌体低氧应激时的表白情景，及甘肃鼢鼠各别于其它大地鼠的抗氧化提防体制，为底栖生物体的低氧符合接洽供给表面按照。重要试验截止如次：1.SOD、CAT、GPx活性、总抗氧化本领(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量慢性低氧前提下，脑中甘肃鼢鼠SOD、CAT活性和T-AOC均有不明显升高(P>0.05)，GPx活性明显升高(P0.05)，SD大鼠变革不鲜明；肝中甘肃鼢鼠SOD和CAT活性明显升高(P0.05)，MDA含量明显低沉(P0.05)，SD大鼠GPx活性明显升高(P三种氧前提下，甘肃鼢鼠和SD大鼠脑构造SOD活性无明显分别(P>0.05)，GPx活性极明显低于SD大鼠(P0.05)，但在急、耐性低氧后，甘肃鼢鼠明显高于SD大鼠(P0.05)，急、耐性低氧组甘肃鼢鼠明显高于SD大鼠(P0.05)，耐性低氧组甘肃鼢鼠极明显低于SD大鼠(P0.05)。证明甘肃鼢鼠和SD大鼠抗氧化形式各别，脑中二者的抗氧化本领十分，肝脏中甘肃鼢鼠抗氧化本领远高于SD大鼠，甘肃鼢鼠抗氧化重要依附SOD和CAT，GPx介入脑构造的抗氧化，SD大鼠脑和肝中GPx均表现要害抗氧化效率。其余，固然甘肃鼢鼠脑中GPx活性在急、耐性低氧中都明显升高，但活性极明显低于SD大鼠。2.SOD1、CAT、GPx1 mRNA表白程度慢性低氧前提下，甘肃鼢鼠除脑中SOD1 mRNA表白量明显升高(P0.05)。证明耐性低氧比慢性低氧更能刺激抗氧化酶基因的转录，其余，低氧应激下甘肃鼢鼠抗氧化体例在mRNA表白量上亦展现出更强的符合性。进一步比拟甘肃鼢鼠和SD大鼠mRNA表白程度，甘肃鼢鼠脑和肝中SOD1 mRNA表白量极明显高于SD大鼠(P3. GPx1基因克隆及底栖生物消息学领会甘肃鼢鼠GPx1基因全长序列长度780bp，包括开始暗号子(ATG)和中断暗号子(TAA)，ORF长度606bp，源代码201个氨基酸酸，硒代半胱氨酸暗号子TGA坐落氨基酸酸序列第47位，mRNA链中检索到I型硒代半胱氨酸插入元件(SECIS)。核苷酸和氨基酸酸序列比对截止表白，在喂奶众生中甘肃鼢鼠GPx1基因序列与盲鼹形鼠一致度最高。甘肃鼢鼠GPx1卵白头等序列中阴电荷氨基酸酸22个，阳电荷氨基酸酸23个，对立分子品质22.3KD，表面等电点 pI=7.67，分子式C997H1556N278O286S8Se1，为不宁静卵白。二级构造以电钻(Helix)、折叠(Strand)、环(Loop)为重要元件，形成搀和型(mixed)构造，无旗号肽及跨膜区，无二硫键。三级构造表露GPx1卵白由四组构造一致的亚单元形成。对二级构造的功效域和功效位点领会创造，甘肃鼢鼠GPx1氨基酸酸序列第14-128位氨基酸酸残基为谷胱甘肽过氧化学物理酶功效域，第35-50位为活性位点，第72-79位为顽固位点，该序列还包括AhpC-TSA家属卵白、ENT、GAS2等构造域。其余，GPx1卵白与硫氧还卵白恢复酶(TrxR)家属配合度极高，二者同属硒酶，提醒卵白质构造与功效相普遍。卵白进化领会表白，甘肃鼢鼠GPx1基因重要体验纯化采用，顽固性较强，但又生存功效分裂和正采用位点。个中，地下鼠和大地鼠间生存明显的功效分裂，后验率胜过0.98(QK>0.98)的氨基酸酸功效分裂确定位点有4个，辨别是2 Cys、10 Gly、158 Ile和199 Gly；其余，经过位点模子检查和贝叶斯法，猜测出4个大概受正采用压力效率的氨基酸酸位点，辨别是129 Glu，147 Phe，199 Gly，200 Ser。那些位点大概证明甘肃鼢鼠抗氧化酶基因对地下生存的符合性进化。

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