论文摘要：宫颈癌靶向多肽的筛选与鉴定

背景及目的

宫颈癌是常见的妇科肿瘤，其发病率在发达国家仅次于乳腺癌、子宫内膜癌，在发展中国家则居首位。宫颈癌的发生与很多因素相关，如早婚、早育、吸烟、长期服用避孕药、免疫低下、病毒感染等，其中最主要的是高危型人乳头瘤病毒的慢性持续感染。目前，宫颈癌治疗主要以手术切除为主，但早期宫颈癌无明显症状和体征，易造成漏诊或误诊，待发现时已到中晚期，丧失最佳手术时机。放疗、化疗毒性极大，受到剂量依赖性和抗药性的影响，效果不理想，病人的五年生存率仍然很低。因此，寻找一种早期、安全、高特异性的筛查方法是目前面临的关键问题之一。

噬菌体展示技术将外源多肽的表型与基因型紧密联系在一起，使得人们在无需预先知道受体分子结构的情况下，就可获得与各种靶分子特异性结合的配体短肽，是一种筛选特异性多肽的高通量、简便、经济的技术。多肽分子质量小、免疫原性低、亲和力高、组织穿透性强、易合成等，因此，有望与适当的荧光标记物、纳米颗粒、脂质体或抗肿瘤药物偶联用于肿瘤的早期影像诊断、靶向治疗、病程监测及疗效考核，对于目前癌症防治所面临问题的解决具有重要的实际意义。

早发现、早诊断、早治疗是提高宫颈癌患者存活率的关键。本实验以期获得与宫颈癌细胞特异性结合的多肽基序，为下一步研发宫颈癌早期影像诊断和靶向治疗探针奠定基础。

方法

本实验以人胚肾HEK293细胞为阴性吸附细胞，宫颈癌SiHa细胞为靶细胞，利用噬菌体十二肽库进行4轮全细胞消减筛选。第4轮筛选得到的噬菌体库不扩增，直接滴定，从LB/IPTG/Xgal平板上随机挑选57个克隆，ELISA初步鉴定阳性克隆，提取阳性克隆DNA测序，推导相应多肽序列，获得若干consensus sequences，软件分析各序列的同源性、氨基酸组成及特征、疏水性等。最后以细胞免疫荧光鉴定阳性噬菌体克隆的结合特异性、敏感性，确定最佳克隆。

结果

1. 经过4轮“吸附—洗脱—富集”消减筛选，与宫颈癌SiHa细胞特异性结合的噬菌体克隆回收量增加21倍；

2. ELISA鉴定结果发现，随机挑选的57个克隆中有36个与SiHa细胞亲和力较高，初步确定为阳性克隆，阳性率为63.16%，其中S7号克隆亲和力最强，但其靶向性有待进一步研究；

3. 阳性噬菌体克隆测序，得到6条共有序列，分别为KNLXXXXXXPLV、ETLXXXXXXIPW、QQLXXXXXXTPY、VTAXXXXXXTPL、SLSXXXXXXTTS、TITXXXXXXSRK；

4. 6条序列之间存在不同程度的重复，其中CSP2和CSP3的相似度最高，达50.0%；

5. BLAST检索显示，6条多肽与某些细胞表面受体、转录因子、免疫球蛋白、转运蛋白等同源性较高；

6. 对6条多肽的组成分析发现，总共出现17种氨基酸，其中丝氨酸、苏氨酸和脯氨酸出现的频率较高，分别为16.67%、15.28%和13.89%；

7. 蛋白等电点检测结果显示，CSP1、CSP5和CSP6为碱性多肽，而CSP2、CSP3及CSP4为酸性多肽；

8. 对6条多肽的疏水性分析发现，除了CSP1为疏水性多肽，其余均为亲水性多肽，CSP2的亲水性最弱，CSP6的亲水性最强；

9. S7克隆与SiHa细胞具有较好特异性及敏感性，确定为最佳阳性克隆，有进一步研究开发的必要。

结论

1. 利用噬菌体展示技术、ELISA、细胞免疫荧光等获得了与人宫颈癌细胞SiHa特异性结合的噬菌体阳性克隆，其中S7克隆（QQLXXXXXXTPY）亲和力最高，特异性、敏感性最强，确定为最佳克隆/肽序；

2. 该肽有望与纳米颗粒、荧光标记物、脂质体或抗肿瘤药物偶联，用于宫颈癌的早期分子影像诊断、病程监测、靶向治疗及疗效考核等。

来源：半壳优胜育转载请保留出处和链接！

本文链接：http://87cpy.com/210851.html