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曲蟮是我国的一种要害国药材,个中含有多种底栖生物活性因素,抗氧化酶的含量尤为充分。曲蟮中所含的抗氧化酶重要有过氧化氢酶、超氧化学物理歧化酶、过氧化学物理酶、谷胱甘肽恢复酶及谷胱甘肽转硫酶等。抗氧化酶具备要害的心理功效,它们可废除体内的氧自在基,提防肌体遭到氧化伤害。所以,从曲蟮体内索取纯化抗氧化酶对于普及曲蟮的归纳运用价格,以及拓宽抗氧化酶的根源具备要害意旨。本接洽初次将闪式索取这一新式索取本领运用于过氧化学物理酶、谷胱甘肽恢复酶及谷胱甘肽转硫酶的索取辨别。闪式索取法具备高效、赶快、俭朴动力及无需加热等便宜,不会妨害底栖生物活性物资。本接洽运用闪式索取法、DEAE-Cellulose离子调换色谱及Sephadex G-75凝胶过滤色谱对曲蟮中的过氧化学物理酶举行了辨别纯化。其余,本接洽运用闪式索取与超声索取相贯串的本领从曲蟮中索取了谷胱甘肽恢复酶,并运用盐酸安非拉酮积淀、硫酸铵积淀以及DEAE-Sepharose琼脂糖凝胶层析柱对曲蟮谷胱甘肽恢复酶举行了纯化。同声,本接洽对过氧化学物理酶及谷胱甘肽恢复酶的索取本领举行了优化,并对两种酶的酶学本质举行了接洽。其余,本接洽胜利运用闪提法从曲蟮中索取了谷胱甘肽转硫酶,并运用CDNB法测定了所索取的谷胱甘肽转硫酶的总生机。截止表白,运用正交考查优化过氧化学物理酶的索取工艺,决定的闪提最优前提为:料液比为1:1,pH值为8.0,闪提功夫为35 s。纯化后过氧化学物理酶比生机到达了783.3 U/mg,接收率为27.8%。过氧化学物理酶分子量巨细为35 kDa,最适pH值为6.0,最适温度为65 ℃。谷胱甘肽恢复酶的最好索取前提为:pH值7.5,料液比1:5,闪提功夫45 s,超声功夫15 min。索取的谷胱甘肽恢复酶比生机到达655.9 U/mg,纯化了32.3倍,接收率为58.4%。谷胱甘肽恢复酶的分子量为110 kDa,其最适pH值和温度辨别为8.0和50 ℃。谷胱甘肽转硫酶的总生机为112.98 U,比生机为0.083 U/mg。本接洽初次从曲蟮中索取了过氧化学物理酶、谷胱甘肽恢复酶及谷胱甘肽转硫酶,个中,过氧化学物理酶及谷胱甘肽恢复酶的比生机及接收率均居于较高程度。本接洽所决定的索取工艺简单、赶快,符合于产业化消费。
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