免费论文摘要：湖北钉螺（Oncomelania hupensis）微卫星DNA文库的创造及多态性位点的挑选

1. 手段湖北钉螺是阿曼血吸虫独一的中央宿主，在传递阿曼血吸虫病中有着至关要害的效率。在我国重要散布于长江流域及其以南的江苏、浙江、安徽、江西、福建、上海、湖南、湖北、广东、广西、云南、四川12个省、直辖市、自制区。因为散布普遍及地舆分隔的感化，湖北钉螺在我国各地域种群之间爆发了鲜明的遗传变异，从而分裂为多个各别的亚种；且在沟通前提下，各别地域钉螺对阿曼血吸虫易感性各别，各地钉螺具备明显性分别。所以，对湖北钉螺的遗传百般性领会既有其底栖生物学上的表面价格，又有着医术上的适用价格。本接洽采用了微卫星DNA本领建立了湖北钉螺微卫星DNA文库，并在此普通之上，采用多态性较好的微卫星DNA序列对6省区的30多个搜集点共200多个个别举行了集体遗传学领会。2. 本领采用华夏陆地湖北省潜江浩口野生钉螺品系，创造湖北钉螺微卫星DNA文库：运用酚-氯仿法索取高品质的湖北钉螺基因组，并在过程Sau3AI酶举行酶切之后，接收200bp至900bp之间的片断，在贯穿SAUL接洽之保守行PCR富集，运用被底栖生物素标志的10条寡核苷酸探针与亲和素贯串举行微卫星DNA序列的挑选、超滤离心富集，反复两次后可获得大局部微卫星DNA序列。在所创造的微卫星DNA文库中，采用反复特性较为鲜明、长度符合的微卫星DNA序列，来举行引物的安排与合成，经PCR本领富集，5%聚丙烯酰胺凝胶电泳并银染，同声运用基因扫描本领举行多态性位点的挑选。采用6个多态性较好的微卫星位点对湖南、湖北、江西、安徽、江苏和浙江6省区的200多个个别举行集体遗传学领会。3. 截止（1）测序共赢得292条序列，个中含有微卫星DNA的序列公有266条。在此266条微卫星DNA序列中创造有12条序列是实足沟通的，一切序列长度均在200 bp之上。比较微卫星序列的计划规则，赢得灵验的微卫星DNA序列共254条，个中完备反复序列66条，占25.98%，非完备反复序列94条，占37.01%，复合反复序列有94条，占37.01%。（2）在湖北钉螺微卫星DNA文库中，抉择了67个典范微卫星位点，在两头侧翼地区安排引物，共安排了67对微卫星DNA引物，结果采用性合成20对扩大与增加引物，个中4个位点展示非奇异性扩大与增加。其他16对微卫星引物经发端挑选获得了14个（70％）湖北钉螺多态性的微卫星位点，个中已实行了7个位点各30个样品的引物荧光标志与基因扫描，个中有6个位点的功效较好，6个位点中仅P84位点的察看杂合度和PIC值较低，辨别为0.1667和0.1813，其他位点的察看杂合度和PIC值范畴在0.36-0.8929和0.8437-0.9289间，具备较好的多态性。（3）共对湖南、湖北、安徽、江西、江苏、浙江、四川的7个集体219个样品的6个微卫星位点举行了基因扫描。截止以Excel表格情势输入，共赢得2628个微卫星DNA位点数据。位子平衡等位基因数量为34.17个，平衡总集体遗传杂合度、集体内平衡杂合度辨别为0.869和0.023。Hardy-Weinberg 平稳检查表白，6个微卫星DNA位点中，T5-13、T6-27、P82居于平稳状况，T5-11和T4-22辨别在湖北、江苏集体中居于不平稳状况，而P84在安徽、江西、江苏和浙江集体中均居于不平稳状况。4. 论断（1）在所创造的微卫星DNA文库中，双核苷酸反复序列占绝大普遍（73.62％），三核苷酸反复序列次之，多核苷酸反复序列最为罕见；双核苷酸反复中以(CA)n和(GT)n最为罕见，反复度数最多的可达98次。（2）运用挑选获得的6个位点30个样品举行荧光标志及基因扫描，各别位点的等位基因子各别，最少的5个，最多22个，平衡16.7个；个中P84位点的PIC 0.5，赢得了较好的多态性。（3）6个微卫星DNA位点中，P84、T5-11和T4-22三个位点辨别各别水平地居于不平稳状况。在总集体中，共检验和测定到205个等位基因，各别位点在种群间平衡为15.33个；等位基因在各别集体中的散布无鲜明的会合趋向。集体内遗传领会表露，一切位点平衡的察看杂合度、憧憬杂合度和PIC 值辨别为0.637、0.811和0.777，多态性鲜明，归纳一切目标的消息，湖北钉螺湖北集体遗传变异水平最高，江苏集体最低。集体间遗传变异领会表白，江苏和江西集体间具备较高的遗传分裂水平，安徽与湖南集体间则分裂水平较小。总群和集体内基因交谈不高，所以杂合度较高；但是集体间分裂系数表白集体间分裂较低，遗传变异重要来自种群内的个别间。

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