免费论文摘要：ANXA2表白程度对人结直肠癌细胞增殖及疏通感化的接洽

结直肠癌是重要恫吓生人人命安康的恶性肿瘤之一，连年因由于人们生存办法的变换及炊事构造不对理，其发病率呈逐年飞腾趋向。暂时手术仍是调节结直肠癌最重要而灵验的本领，然而5年存在率从来未有鲜明普及。跟着分子底栖生物学本领的兴盛，肿瘤的基因调节给废除暗疾带来了新的蓄意。基因调节的要害在乎基因靶点的采用。与一切肿瘤一律，结直肠癌的爆发也是一种多成分效率，多基因介入，多阶段产生的搀杂病理进程。ANXA2是钙磷脂贯串卵白Annexin超家属的分子之一，该基因定坐落生人染色体15q21-q22，由13个外显子和12个内含子构成，其表白产品ANXA2卵白在细胞中以单体、异源二聚体、异源四聚体三种情势介入膜产生、膜转运、胞吞、胞吐、细胞增殖、旗号转导、分裂及凋亡等一系列要害的人命进程。连年来稠密的接洽仍旧证明ANXA2的表白失调与多种肿瘤的爆发兴盛出色关系，其表白在生人绝大普遍肿瘤中均上调，这种过表白局面与肿瘤的爆发、兴盛、浸湿、变化及预测后果差等出色关系。RNA干预(RNA interference, RNAi)是连年来创造的一种要害的转录后基因安静局面，具备高效性，高奇异性等特性，暂时已变成基因功效接洽的宏大东西并在肿瘤的接洽及调节上面具备宏大的运用远景。本舆论在归纳国表里接洽发达的普通上，沿用RNA干预本领，以质粒为载体建立靶向ANXA2的siRNA，并初次转染人结直肠癌细胞株Caco-2，查看控制ANXA2的表白对Caco-2细胞成长特性的感化及其关系体制的发端商量，为RNAi在结直肠癌的基因调节中奠定普通。手段：接洽siRNA介导的ANXA2基因安静对人结直肠癌细胞Caco-2底栖生物学动作的感化及其关系体制，商量ANXA2在结直肠癌爆发、兴盛中的效率，为以ANXA2为靶点的结直肠癌基因调节供给表面和试验按照。本领：（1）对准ANXA2的ORF序列安排四条小干预RNA序列和一条阴性比较序列，辨别建立表白这四个序列和阴性比较序列的pU6H1-GFP-siANXA2重组质粒；（2）经过脂质体转染试药LipofectamineTM 2000介导，将重组质粒导出人结直肠癌Caco-2细胞，同声创造阴性比较组和野生比较组。转染后24h荧光显微镜查看细胞的转染功效；48h颠倒显微镜查看细胞样式的变革； （3）沿用逆转录会合酶链式反馈（RT-PCR）从mRNA程度检验和测定重组质粒对细胞中ANXA2的控制功效；（4）沿用细胞免疫性化学和Western blot本领从卵白程度检验和测定转染后72h siRNA对ANXA2的控制功效；（5）沿用MTT试验检验和测定转染pU6H1-GFP-siANXA2重组质粒的Caco-2细胞活性，辨别计划转染后24h、48h、72h、96h、120h细胞的成长控制率, 查看重组质粒对Caco-2细胞成长增殖的感化；（6）沿用Hoechst 33258染色试验检验和测定转染重组质粒的Caco-2细胞凋亡情景，于转染后48h、72h各组辨别随机计数200个细胞，计划细胞凋亡率；(7) 沿用伤害建设试验检验和测定控制ANXA2表白对Caco-2细胞疏通力的感化。截止：(1) DNA测序证明胜利建立了对准ANXA2基因的siRNA重组质粒载体（pU6H1-GFP-siANXA2）；（2）重组质粒效率Caco-2细胞48h后，样式学看来野生组Caco-2，细胞贴壁成长振奋，边境领会，呈上皮样细胞样式，看来较多的核分割相，而转染pU6H1-GFP-si ANXA2的细胞样式爆发鲜明变换，细胞贴壁本领低沉、密度贬低、细胞变小、变圆、颗粒增加、碎片减少、并有脂滴产生。阴性比较组细胞与野生型细胞样式上未见鲜明分辨。转染功效约为40-50%；（3）半定量RT-PCR检验和测定截止表露所建立的4组重组质粒载体对人结直肠癌Caco-2细胞中ANXA2基因的表白均表现了各别水平的干预效率，个中以ANXA2-siRNA1载体的干预功效最强，在转染后72h，控制率高达70%；（4）细胞免疫性化学和Western blot检验和测定截止也表露转染ANXA2-siRNA1重组质粒后72h的Caco-2细胞ANXA2卵白程度明显低沉，截止与RT-PCR基础符合；(5) MTT检验和测定截止表露4组pU6H1-GFP-siANXA2重组质粒对Caco-2细胞的增殖均具备鲜明的控制效力，从转染后48h发端细胞增殖遭到控制，72~120h时细胞增殖被极鲜明控制 (p（6）Hoechst染色截止表白转染ANXA2-siRNA1后48h查看到具备典范凋亡特性的Caco-2细胞, 凋亡细胞占19.06±6.82%，效率72h后视线中凋亡的Caco-2细胞数目渐渐增加，凋亡细胞比率达25.57±5.56%，沟通功夫点转染组与比较组均具备极明显性分别（p(7) 伤害建设试验截止表白pU6H1-GFP-siANXA2对Caco-2细胞的疏通力具备鲜明的控制效率，与阴性比较组（NT-siRNA），野生比较组比拟，具备极明显性分别（p论断：ANXA2与人结直肠癌Caco-2细胞的成长、增殖、凋亡及疏通力出色关系，控制ANXA2的表白可控制Caco-2细胞的增殖力和全党外迁徙本领，激动细胞凋亡。对ANXA2基因表白的干涉动作一种新的基因调节本领在结直肠癌调节上面的运用后劲犯得着进一步接洽，将给结直肠癌的调节带来新的思绪和战略。 要害词：膜联卵白A2，结直肠癌细胞，细胞疏通，细胞增殖，RNA干预

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