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摘?? 要植被多胺氧化降解产品过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)介入发育进程中的细胞壁老练和木质化以及病原熏染进程中的创伤愈合、细胞壁加厚进程。动作一种旗号分子,多胺氧化降解产品H2O2介导细胞牺牲、超敏反馈以及提防基因表白。迩来的接洽表白,多胺氧化降解产品H2O2介入毛豆侧根发育,铜胺氧化酶(copper amine oxidases, CuAO, EC 1.4.3.6)催化产品H2O2在ABA开辟的胡豆气孔封闭进程中表现了要害效率,本试验室的接洽也证明CuAO及其催化产品H2O2介入光/暗调节和控制胡豆气孔疏通,但于今尚未见CuAO及其催化产品H2O2介入大概根爆发的通讯。本试验以绿豆(mung bean)为资料,借助药道学领会、激光扫描共聚焦显微镜本领及酶活性领会本领,接洽了CuAO及其催化产品H2O2在绿豆下胚轴大概根爆发进程中的效率。本接洽对于进一步领会多胺氧化降解在根发育进程中的效率以及大概根发盼望理有要害表面意旨。重要试验截止如次:1. CuAO催化腐胺(putrescine, Put)氧化降解,所试浓淡CuAO潜心性控制剂氨基酸胍(Aminoguanidine, AG)明显控制大概根爆发,且呈鲜明剂量和功夫依附效力。CuAO活性贬低控制生根,表白CuAO大概介入绿豆下胚轴插条大概根爆发。2. CuAO催化Put氧化降解的重要产品是H2O2,NH3和4-氨基酸丁醛,4-氨基酸丁醛再经几步反馈可天生γ-氨基酸丁酸(GABA)和琥珀酸(Succ)。本试验截止表白,H2O2、NH3、GABA和Succ四种催化产品中惟有H2O2明显激动大概根爆发,而NH3、GABA和Succ无明显激动效率。其余,四种催化产品中惟有H2O2不妨明显逆转AG对大概根爆发的控制效力。那些截止表白,CuAO的催化产品H2O2在绿豆下胚轴大概根爆发中起效率。3. Put为CuAO催化底物,AG控制大概根天生的效力也大概与Put减少相关。咱们的截止证明,外源Put并不感化生根,看来CuAO控制剂控制大概根天生与Put减少无干。4. 运用H2O2奇异荧光探针H2DCF-DA和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检验和测定插条基部0-2mm生根地区横切片内源H2O2程度及其散布的截止表白,比较和AG处置插条H2O2荧光重要散布在维管构造之间的地区及正在产生的根原基中,0-60h功夫范畴内上述地区H2O2荧光渐渐巩固,表露H2O2荧光的细胞渐渐增加,荧杂面积渐渐夸大,且H2O2荧光的巩固先于大概根的产生。与比较同期比拟,AG处置H2O2荧光较弱,荧光范畴较小,根原基发育对立推迟。此截止表白,AG处置简直经过惹起内源H2O2含量的贬低进而控制生根,CuAO催化产品H2O2真实介入了大概根爆发。5. 本试验以构造化学原位检验和测定法对大概根爆发进程中插条基部0-2mm生根地区横切片CuAO活性程度举行了检验和测定。当过氧化学物理酶生存时,H2O2与3,3-二氨基酸联苯胺(Diaminobenzidine, DAB)贯串登时原位天生宁静的红棕色会合物,当供给充满底物Put时,比较和AG处置DAB染色的分别可转弯抹角反应出H2O2 天生酶CuAO活性的巨细及变革。截止表白,比较和AG处置插条基部生根地区DAB染色所得红棕色积淀重要散布在维管构造之间的地区及正在产生的根原基中,0-60h功夫范畴内上述地区红棕色积淀强度渐渐减少,表露红棕色染色印迹的细胞渐渐增加,表面积夸大,红棕色积淀减少先于大概根产生,那些与H2O2荧光的散布及变革普遍。与比较同期比拟,AG处置红棕色积淀较少,积淀散布范畴较小,根原基发育也对立推迟。比较与处置比拟,DAB染色的净增量表白CuAO活性表露渐渐减少的趋向。此截止表白,CuAO真实介入大概根爆发。综上所述,本接洽的截止表白CuAO及其催化产品H2O2真实介入绿豆新苗下胚轴大概根爆发,二胺氧化降解在大概根爆发进程中起着要害效率。?
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