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血清白蛋白作为血浆中含量丰富的蛋白质,能广泛与内源和外源性物质结合,因而血清白蛋白与药物分子的作用研究十分活跃。近年来,天然药物分子与生物大分子之间相互作用的基础研究已逐渐成为国内外学者关注的热点。而中草药作为我国的瑰宝,所含的活性药物成分与蛋白质等生物大分子之间相互作用的研究却起步较晚,加上人们对药物分子与生物大分子之间相互作用的机理还缺乏深层次认识,中草药活性成分与生物大分子之间的相互作用机制研究就成为新世纪化学与生命科学及医药学学科交叉发展的重要课题之一。
研究药物分子与生物大分子之间相互作用的常用方法是光谱法,但是它却不能高通量研究药物分子与生物大分子的相互作用,而中药的化学成分都非常复杂,如果将中药的活性成分都分离出来,再逐个研究它们的作用机制,就违背了中药的治疗强调整体性和协调性的原则。为解决这个问题,本论文通过建立在线透析采样偶联高效液相色谱系统(DS-HPLC),并将该系统应用于中药丹参水溶性成分与生物大分子牛血清白蛋白相互作用的研究,以期解决同时研究中药中多成分与生物大分子间相互作用的问题,为中药活性成分与生物大分子之间的相互作用机制的研究提供了信息和依据。
本研究论文内容共包括三章。
第一章 综述
首先从蛋白质的结构、血清白蛋白的结构与血清白蛋白的光学性质三个方面对中药分子与生物大分子之间相互作用研究的生物基础进行了描述;然后从药物分子与血清白蛋白相互作用常用的研究方法的原理、应用情况及存在的问题等方面展开评述,从理论上探讨了分子与血清白蛋白的识别与作用机理;介绍了微透析采样与高效液相色谱联用技术及其应用;最后,通过丹参水溶性成分与血清白蛋白相互作用的研究现状分析,提出以丹参中水溶性成分为对象,建立同时研究中药中多成分与生物大分子间相互作用的系统。
第二章 在线透析采样偶合高效液相色谱系统及丹参中水溶性成分透析特性研究
基于中药治疗的整体性和协调性的原则,本文建立了透析在线采样与高效液相色谱联合系统,同时研究中药中多成分与血清白蛋白的结合作用机理。本章以丹参中水溶性成分为载体,对系统的透析特性及高效液相色谱分离检测进行了比较全面的考察。实验讨论了微透析膜面积、灌流液流速等影响因素对中药分子透析率的影响,选择的最佳条件为:灌流液流速2.5 μL/min、微透析膜管长度9 cm。实验结果表明该体系具有良好的准确性和可靠性。
第三章 DS-HPLC研究丹参中水溶性成分与牛血清白蛋白结合特性
本文在实验条件接近人体生理环境的pH 7.4的磷酸缓冲液中,将透析在线采样与高效液相色谱联合系统应用于中药丹参中水溶性成分与牛血清白蛋白间的结合作用机理研究。实验从色谱和紫外光谱的角度同时考察了缓冲液pH,温度对药物的结合度的影响,计算了药物分子的结合度、结合常数及热力学常数,并根据热力学常数确定了丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸和阿魏酸与牛血清白蛋白之间的主要作用力。
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