免费论文摘要：Kalirin-7单克隆抗原的制备与审定

Rho鸟嘌呤核苷酸调换因子(guanine nucleotide exchange factors, GEFs)和Rho GTPase激活卵白(GTPase activating proteins, GAPS)在核心神经体例（Central nervous system, CNS）被用来激活特出Rho GTPase家属分子，所以激励多种安排神经的样式、成长和可塑性的旗号体制，在少许场所经过它们感化肌动卵白细胞骨子。Kalirin是一个大的神经双Rho GEF，它经过其两个Rho GEF区激活Rac1、RhoA和RhoG。这个激活受功夫和空间上的调节和控制，并承诺Kalirin感化神经突（neurite）的开始、轴突成长和树突状样式产生。这个采用性剪接基因产品进一步转录，其爆发的卵白定位在突触后精致区(postsynaptic density, PSD)。树突棘的产生须要与PSD-95彼此效率的Kalirin-7。并且，Kalirin能安排和感化神经样式产生的其余上面，这经过卵白质-卵白质间各别的地区彼此效率实行，囊括很多血影卵白（spectrin）区、其余卵白及脂类彼此效率区，还不妨和一个潜伏的激酶彼此效率。那些彼此效率提醒，其不只与神经样式爆发相关，也与囊泡输送、渗透、神经保护和神经变性的病症相关。树突棘构造和功效上的变换激动多种心理进程，比方突触传播和突触可塑性，从而展现与动作上，个中囊括进修与回顾。其余，树突棘样式爆发和可塑性的变换是很多神经发育凌乱和精神病凌乱的一种内涵展现型。所以，在近些年中对于安排树突棘可塑性的分子体制，及关系的病理分子体制从来是一个接洽热门。迩来一系列的接洽精确了kalirin-7是树突棘发育进程中要害的安排因子，也是树突棘构造可塑性和功效可塑性中要害的安排因子，那些使咱们对树突棘的动静变革有了进一步的领会，同声供给了一个对于树突棘构造可塑性的分子安排体制模子，该模子说领会kalirin-7在少许性能凌乱性病症(囊括精力分割症和阿尔茨海默症)的突触病理中的效率。咱们合成了kalirin-7 C终局的19个氨基酸酸的序列和一个半胱氨酸残基的由20个氨基酸酸构成的短肽。这条20个氨基酸酸的短肽是半抗原，用BMS (m-maleimidobenzoy-N-hydoxysuccinimide ester)将这条短肽与KLH（钥孔嘁蓝卵白）交联起来，制备成抗原，免疫性雌性Balb/c小鼠。第三次免疫性后的第9天测血小板效价，3号小鼠效价最高，为1：6.4×104。取3号小鼠脾脏中的B淋巴液细胞与SP2/0细胞举行细胞融洽。过程细胞克隆化后，最后赢得渗透抗原的杂交瘤细胞两株，3C4和4G7，并制备出相映的抗原。抗原审定截止如次：（1）对挑选出的两株抗kalirin-7的抗原的单克隆细胞的细胞培植液举行审定,测定3C4亚类为IgG1，4G7亚类为IgG2a，它们亚型均为κappa；（2）用转弯抹角ELISA检验和测定的本领测得抗kalirin-7的抗原3C4小鼠腹水效价为1：4×104，4G7小鼠腹水效价为1：2×104；（3）用转弯抹角ELISA检验和测定的本领测得抗kalirin-7的单克隆抗原3C4亲和力常数为2.25×1011，4G7亲和力常数为3.64×109；（4）免疫性组化审定截止杰出。

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