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底栖生物氧化是为需氧细胞的人命震动供给能量的进程。在平常心理情景下,氧化进程连接爆发以氧为根源的自在基,如O2-·,·OH等,人们称之为活性氧(reactive oxygen species,ROS),咱们肌体内生存着一系列的酶体例和非酶体例连接地对自在基举行废除,进而养护细胞、构造免遭氧化妨碍,但在病理情景下,自在基爆发过多会惹起体内抗氧化体制不及或耗竭,氧化学物理和抗氧化学物理的平稳失调,激励氧化应激,诱发百般病症,如暗疾、单薄、肝强硬、类风湿性关键炎、糖尿病以及神经构造蜕化病症等。洪量接洽表白,有理服用少许抗氧化剂或自在基废除剂,可灵验减少自在基对肌体的伤害,提防该类病症的爆发。上个世纪,少许人为合成的抗氧化剂如二叔丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯(PG)、叔丁基羟基茴香醚(BHA)和特丁基对苯二酚(TBHQ)等被普遍运用于食物产业范围,但其安定性遭到人们的质疑,而自然抗氧化剂以其根源广、安定性高、抗氧化活性强等便宜倍受人们喜爱。所以,开拓更多更好的自然抗氧化剂具备要害的实际意旨。正文综述了柿叶资源大概、柿叶的化学因素及柿叶中重要因素黄酮类复合物的药理效率,测定了柿叶纯化学物理中槲皮素和山奈酚的含量,接洽了柿叶粗提物和纯化学物理的全党外抗氧化本领以及纯化学物理对CCl4开辟的小鼠慢性肝伤害的养护效率。经过之上接洽,以期为开拓和运用柿叶资源供给参考和试验按照。试验重要分四局部来举行:第一局部:柿叶黄酮(flavonoids of persimmon leaves,PLF)的索取和纯化。柿叶枯燥粉末80 g,70%乙醇,索取温度85℃,索取度数2次,料液比1﹕15,索取功夫辨别为4 h和2 h,兼并索取液,6000 r/min离心10 min,上清液50℃减压浓缩,50℃烘干,得液体粉末状柿叶总黄酮粗提物PLF。将PLF粗提液顺序用火油醚(petroleum ether)、氯仿(chloroform)、乙酸乙酯(ethyl acetate)、正丁醇(n-butanol)萃取3次,移除火油醚,其他各相萃取液在回旋挥发仪上减压浓缩,将之上浓缩物在50℃烘箱中烘干称重,计划氯仿相(chloroform fraction,CF)、乙酸乙酯相(ethyl acetate fraction,EAF)、正丁醇相(n-butanol fraction,BF)及余相(surplus fractions,SF)得率及其黄酮的含量及纯度。第二局部:HPLC领会测定EAF(纯度为81.06%)中槲皮素和山奈酚的含量。以SinoChrom ODS-BP (250 × 4.6mm,5μm)为色谱柱;丙醇 - 0.4%盐酸溶液梯度洗脱,0 ~ 30 min内丙醇浓淡由35% ~ 60%;风速为1 mL/min;紫外检验和测定射程:360 nm;柱温:室温;进样量:20 μL。第三局部:EAF和PLF全党外抗氧化本能比拟接洽。沿用DPPH法测定了PLF和EAF对1,1-二苯基-2-苦苯肼自在基(DPPH·)的废除本领;用NBT-NADH-PMS体制测定PLF和EAF对超氧阴离子自在基(O2-·)的废除效率;用Fenton法测定PLF和EAF对羟自在基(·OH)的废除本领;测定了PLF和EAF的恢复本领以及沿用Fe2+开辟的脂质过氧化反应付比领会了PLF和EAF的抗氧化本领。第四局部:EAF对CCl4致小鼠慢性肝伤害养护效率的接洽。沿用各别浓淡的EAF盐溶液灌胃7 d,1次/日,末次给药3 h后腹腔打针0.1% CCl4(20 mg/kg),创造小鼠慢性肝伤害模子。造模24 h后正法小鼠,测定各别剂量的EAF对血小板谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性盐酸酶(AKP)活性,肝超氧化学物理歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化学物理酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的感化,同声对肝构造举行病道学查看。重要的试验截止如次:1. PLF的索取及纯化:经提博得粗黄酮液体粉末品质为18.67 g,粗黄酮的得率为23.34%,总黄酮的含量为4.96%,黄酮纯度为22.17%;PLF经纯化后各相索取物得率SF(10.53%)> BF(3.00%)> CF(2.94%)> EAF(1.53%);各相黄酮含量为EAF(1.24%)> BF(1.02%)> SF(1.00%)> CF(0.39%);黄酮纯度为EAF(81.06%)> BF(34.10%)> CF(13.10%)> SF(9.46%)。2. HPLC领会:槲皮素和山奈酚进样量在0.04 ~ 0.60 μg的范畴内均有杰出的线性联系,关系系数均为0.9981(n = 6),槲皮素和山奈酚的平衡接收率(n = 6)辨别为99.47%和102.7%,RSD值辨别为0.903%和0.469%。EAF中槲皮素和山奈酚的平衡含量辨别为97.52 ± 2.30 mg/g 和103.6 ± 3.73 mg/g。3. PLF和EAF全党外抗氧化活性接洽:纯化后的EAF较PLF有更强的废除羟自在基的本领,废除DPPH·、O2-·和·OH的IC50辨别15.9 μg/mL、59.0 μg/mL、8.35 μg/mL,其余,EAF展现出较强的恢复力和控制脂质过氧化本领(IC50 = 82.6 μg/mL)。4. EAF对CCl4开辟小鼠慢性肝伤害的养护效率:各别剂量的EAF均明显地贬低血小板中ALT、AST、AKP值,巩固肝中SOD、GPx、CAT的活性,贬低肝构造匀浆中MDA的含量,减少CCl4对肝脏细胞的病理伤害。
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