免费论文摘要：丹参晚期胚胎富集卵白基因的克隆及功效接洽

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为唇形科（Labiatae）鼠尾草属植被，普遍散布在热带回温带之间，具一致窘境耐受性和生态符合性。丹参是我国保守大量国药材之一，以枯燥的根及根茎入药，在临床上用来调节心血管病症，具备活血通络、祛淤止痛、清心除烦、凉血消痈等效率。跟着丹参资源的开拓和运用，丹参药材的需要量日益延长。运用底栖生物本领本领来发掘丹参的抗逆基因齐头并进一步接洽植被抗逆体制，是挑选和培养崇高丹参种质的灵验战略。其余，窘境威吓与药用植被次生新陈代谢产品的合成有着出色联系，经过抗逆体制的接洽无助于于领会丹参次生新陈代谢产品积聚与情况威吓的联系。晚期胚胎富集卵白基因是丹参中一类要害的抗逆基因。LEA卵白是胚胎毛育后期健将中高程度积聚的一系列卵白质，遭到发育阶段、零落酸、盐和低温等成分的安排。本接洽在对丹参转录组数据库领会的普通上赢得一个新的晚期胚胎富集卵白基因（SmLEA2），经过对其举行基因克隆、表白形式接洽来领会该基因的基础特性；将该基因在大肠杆菌中举行适量表白，比拟重组菌与比较菌的耐盐及耐旱性；以本试验室建立的过表白SmLEA1（Genbank ID ：AY725206）基因的丹参转基因植株为资料，商量其在威吓处置前提下SOD活性、MDA、Vc和GSH含量等心理生物化学个性的变革，发端精确了SmLEA基因介入丹参抗逆和提防反馈的功效。SmLEA功效的发端证明为丹参抗逆基因的接洽供给了确定的数据，也为经过基因工程本领来普及丹参抗逆性奠定了普通。重要接洽截止如次：1. 运用PCR本领从丹参cDNA以及gDNA程度克隆获得了SmLEA2基因。该基因gDNA长 1961 bp，由1个外显子和1个内含子构成，且内含子两头具备GT/AG顽固序列；盛开观赏框长为960 bp，共源代码 319 个氨基酸酸。序列比对截止表露，该序列与毛豆、大麻子、拟南芥的晚期胚胎充分卵白有较高的一致性，估计该源代码卵白属于晚期胚胎卵白 LEA家属分子。应用Protscale、TMHMM、TargetP、NetPhos和SOPMA等底栖生物消息学软硬件对该基因源代码卵白举行序列领会，截止表白：SmLEA2是生存于细胞质中的亲水卵白，二级构造以不准则弯曲为主，无跨膜构造域和旗号肽，其分子量为35.34 kD，等电点为4.77。2. 沿用DNA Walking的本领赢得了约864 bp的SmLEA2 5’端侧翼序列。PlantCARE软硬件领会表露该调节和控制地区含有多种顺式效率元件，囊括ABRE、 TGACG-motif、CGTCA-motif、 ERE等与荷尔蒙相应关系的顺式效率元件、MYB转录因子贯串位点以及Box 4、CACGTGG-Box等与光开辟关系的元件等。及时荧光定量PCR领会截止表露，SmLEA2基因在植被的根、茎、叶、花和健将中均有表白。3. 建立了SmLEA2的原核表白载体，并在大肠杆菌BL2第11中学表白了SmLEA2卵白，赢得了过表白SmLEA2卵白的重组菌。卵白电泳截止表露，该卵白分子量约为39 kDa，与底栖生物消息学猜测截止相普遍。在平常培植前提下，重组菌和比较菌的成长无明显分别，证明适量表白SmLEA2卵白不会感化大肠杆菌BL21的平常成长。耐盐性领会截止表白，在含400 mM NaCl的LB液体培植基中，重组菌比比较菌的成长本领强；在增添800 mM NaCl的LB液体培植基中，重组菌比比较菌具备更短的成长迟滞期，表白SmLEA2卵白的表白普及了大肠杆菌的耐盐本领。抗旱性领会截止表白，在增添400 mM 甘霖醇的LB液体培植基上，重组菌比比较菌的成长本领有所巩固；在含15% PEG的LB液体培植基中，重组菌比拟比较菌提早了1 h加入对数成长期，表领会SmLEA2卵白的表白也不妨普及大肠杆菌的抗旱本领。4. 以本试验室建立的过表白SmLEA1基因的丹参转基因植株为资料，领会了SmLEA1介入丹参抗逆反馈的个性。转基因丹参、野生型和转机载丹参在MS培植基中成长状况普遍，证明在平常培植前提下SmLEA1基因的适量表白对丹参成长没有明显感化。而在增添100 mM NaCl和150 mM甘霖醇的MS培植基上，转基因植株的成长状况鲜明优于野生型和转机载植株。在NaCl威吓下，转基因植株的SOD活性、Vc、还原形谷胱甘肽和可溶性糖的含量明显普及。在10% PEG威吓处置后，转基因植株中MDA含量较野生型和转机载植株明显贬低，受伤害水平低。综上所述，过表白SmLEA基因能普及大肠杆菌和丹参的耐盐、抗旱性，证明SmLEA基因具备耐盐、抗旱功效，本接洽为丹参抗逆体制的接洽奠定了确定的普通。

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