免费论文摘要：转录因子PAP2对丹参酚酸类产品合成的感化

丹参（Salvia?miltiorrhiza?Bunge）为唇形科鼠尾草属有年生草本植被，是我国保守宝贵大量药材之一，其重要药理活性因素为脂溶性二萜醌类和水溶性酚酸类复合物，具备活血祛瘀、养血补血、通利关脉、取消烦心等多种药道学活性，被普遍运用于心血管等病症的调节。连年来，跟着丹参更多灵验因素及其新的药道学效率被创造，丹参药材需要量逐年减少。暂时野生丹参资源日益缺乏，培植丹参品德渐渐蜕化，所以运用新颖底栖生物本领本领培养优等品系具备要害的意旨。?持久此后，丹参水溶性因素被觉得是其表现药效的重要物资普通。暂时经过丹参多倍体开辟、毛状根培植等本领能普及其酚碱性因素的含量，但功效甚微。鉴于分子底栖生物学和基因工程而兴盛起来的药用植被次生新陈代谢工程在普及某些药用植被一定次生新陈代谢物或底栖生物学个性目标上面具备宏大的运用远景。药用植被次生新陈代谢工程所采用的战略重要有两个上面：其一是采用RNAi或过表白某些次生新陈代谢物合成的要害酶基因从而遏制其产量，而植被新陈代谢道路是由多种酶介入的多步反馈,? 对单个基因举行化装偶尔难以生效；其二是鉴于转录因子不妨与植被次生新陈代谢道路关系酶基因调节和控制序列中沟通或一致的顺式效率元件贯串，到达调节和控制所有新陈代谢道路的个性，经分子底栖生物学本领安排一定转录因子的表白，普及一定复合物的积聚。已有的接洽表白，MYB类转录因子普遍介入了植被苯丙烷类新陈代谢道路的安排。本试验室前期接洽创造丹参酚酸类活性物资合成稠密关系酶基因的启用子地区均含有MYB贯串位点，咱们估计MYB类转录因子大概在酚酸类物资的合成及共同表白中具备要害的调节和控制效率。为此，咱们将拟南芥MYB90家属转录因子PAP2在丹参中过表白，试图挑选出某些酚酸类因素含量明显普及的株系，为遥远崇高丹参赛作品系的选择和培育供给普通。重要接洽实质及论断如次：1. 从NCBI的核酸数据库中载入拟南芥PAP2基因的全长序列，运用DNAStar软硬件上的ORF finder找到完备的读码框，采用拟南芥PAP2基因上750bp的片断做为目的靶片断，建立PAP2过表白的pCAMBIA1302载体，运用叶盘法介导的丹参遗传变化，将载体pCAMBIA1302/ PAP2沿用热激法变化入丹参，在潮霉素浓淡为（Hyb 5mg/L）的采用培植基上采用4-5次后，DNA程度的PCR检验和测定赢得9个阴性株系。2. 沿用及时定量PCR对9个阴性株系中PAP2基因的表白程度举行检验和测定，以及领会此转录因子基因在丹参植株中的表白形式，截止表露，赢得的9个阴性株系中，有4株PAP2基因的表白水平衡展现为鲜明的上调，且过表白的功效由高到低顺序为PAP2-8、PAP2-4、PAP2-13、PAP2-7，其它赢得的株系则为假阴性。在领会其器官奇异性时，PAP2基因在叶和根的部位均有表白，且表白的程度有较大的分辨，在茎中无表白，从表白量领会，PAP2基因在叶中的表白量最高，且远高于根中的表白量。3. 沿用高效液相色谱来检验和测定丹参各别部位的四种水溶性酚酸因素，辨别为丹参素、咖啡茶酸、迷迭香酸以及丹酚酸B的含量。截止表白，转基因株系中丹参素、迷迭香酸以及丹酚酸B的含量均有普及，而咖啡茶酸含量变革不鲜明。4. 创造了PAP2转录因子调节和控制丹参酚酸合成的转录激活新功效领会了三个阴性株系中明显变革的标记性新陈代谢产品和分别性表白基因，截止表白，PAP2转录因子经过激活苯丙烷新陈代谢道路中PAL、C4H、4CL-1和酪氨酸新陈代谢道路中TAT基因的表白，激动了酚酸类物资的合成积聚；以及花青素新陈代谢道路上F3’H、F3’5’H基因的表白。5. 沿用Stephen Y.Lin等人的分量法来检验和测定总木质素的含量以及酸可溶性（Acid lignin）木质素和克拉森(Klason)木质素的含量。截止表白，转基因株系中酸可溶性木质素含量无鲜明分别，Klason木质素含量有所贬低，进而总木质含量也有小批的贬低，大概与CCR及COMT基因表白量下调关系。6. 沿用Folin-Ciocalteu法、Dewanto V等人的氯化铝——亚王水钠比色法以及花青素等测定本领辨别测定总酚酸、总黄酮和花青素的含量。截止表白花青素、黄酮的含量均有小批的普及。

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