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神经干细胞(neural stem cell,NSCs)是一类不妨自我复制与革新,并增殖分裂为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞的干细胞,不只生存于胚胎期,并且也散布于成体神经体例中。成体神经干细胞的创造拓展了神经干细胞的接洽范围,为细胞代替法调节核心神经体例病症供给了杰出的种质资源。β小粉样卵白(Amyloid-β protein, Aβ)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者脑内暮年斑(Senile plaques, SP)的中心因素,在AD病理过程中表现着要害的效率,变成全党外接洽调节AD的要害性成分。茶多酚(tea polyphenols, TP)是从瓜片的叶中索取出来的一种黄烷醇类物资,因其杰出的抗氧化本领和多种药理个性,被普遍地用来脑缺血、控制肿瘤、防疫血汗管病症以及神经退行性病症等上面的接洽。本接洽经过查看和检验和测定各别浓淡Aβ对神经干细胞的伤害效率,进一步商量了茶多酚对伤害神经干细胞的养护效率,从细胞程度上接洽茶多酚大概的养护体制,为临床大将茶多酚用来防疫神经退行性病症供给试验参考和按照。试验以14-15天的胎鼠脑构造为资料,从海马辨别离、全党外培植入迷经干细胞,免疫性细胞化学本领审定神经干细胞奇异性外表抗原。以各别浓淡的Aβ25-35 (10,20,40μM)对神经干细胞举行伤害处置,从样式学查看、细胞存活水平以及过氧化氢酶(CAT)的活性等上面领会神经干细胞的伤害情景,决定出惹起细胞伤害的最好浓淡。进一步接洽了茶多酚对伤害神经干细胞的感化,从样式学查看、细胞存活率、氧化应激程度(SOD活性和MDA含量变革)、凋亡程度检验和测定上面领会茶多酚对神经细胞的养护效率,并沿用RT-PCR法发端商量了茶多酚表现养护效率的分子体制。截止如次:1.神经干细胞的辨别、培植和审定:沿用板滞研磨法从孕14-15天的胎鼠脑构造中辨别出单个细胞,育种举行培植,培植3天时展示小批会合成团的细胞,培植7天时看来较大的神经球,边境明显,举行传代。对传代3次后的神经球和血小板开辟后的神经干细胞沿用免疫性细胞化学法审定Nestin、GFAP 、NSE呈阴性表白,证明辨别培植出具备增殖和多向分裂潜能的神经干细胞。2. Aβ25-35惹起的神经干细胞伤害效率:各别浓淡凝固态Aβ25-35(5、10、20μmol/L)与传代3次后的神经干细胞共培植,镜下查看细胞的样式变革创造细胞体积变小、胞核不完备、折射性低沉以及展示凋亡小体等特性;吉姆萨染色进一步证明生存有凋亡的细胞。搜集培植6、12、24、36、48h后的细胞,台盼蓝染色计数细胞存活率,截止表露:与比较组比拟,共培植24h时,10μmol/LAβ25-35组细胞存活率明显低沉(P25-35组细胞存活率极明显低沉(P)。检验和测定共培植24h时各组细胞中CAT生机,截止表白:与比较组比拟,Aβ25-35试验组中CAT生机均低沉并表露确定的浓淡依附性,5μmol/L和10μmol/L Aβ25-35细胞CAT生机有所低沉,但不具备统计学意旨(P>0.05);20μmol/LAβ25-35组细胞CAT活性极明显低沉(P)。3.茶多酚对伤害神经干细胞的感化:与Aβ25-35组比拟,各别浓淡TP(10、20、40μg/ml)均能普及细胞的存活率,养护细胞样式的完备性,个中20μg/mlTP对伤害细胞的养护效率分别极明显(P)。看来光法测定细胞SOD生机和MDA含量,截止表露:Aβ25-35组中SOD活性鲜明低沉(P),MDA含量明显减少(P);与Aβ25-35组比拟,10ug/mlTP组SOD活性升高且MDA含量低沉,但分别不明显(P>0.05);20 μg/mlTP组中细胞SOD活性极明显地普及(P),MDA含量低沉但不具备统计学意旨;40μg/mlTP处置组中SOD生机低沉,分别明显(P),同声MDA含量升高,分别明显(P)。DNA ladder检验和测定细胞凋亡表露:20μmol/L Aβ25-35组展示鲜明的细胞凋亡梯带,各别浓淡TP组中凋亡梯带的数目各别。RT-PCR检验和测定凋亡关系基因表白表露:比较组中无bcl-2和bax;Aβ25-35组中bax较强表白,bcl-2表白弱;TP处置组中bcl-2、 bax均表白。综上所述,本接洽表白凝固态的Aβ25-35对神经干细胞具备伤害效率,可妨害细胞的样式、构造,贬低细胞存活率及CAT的活性;茶多酚对Aβ25-35惹起的神经干细胞伤害具备确定的养护效率,不妨拮抗细胞的氧化应激和凋亡效率,为将茶多酚更好地用来调节阿尔茨海默病等神经体例病症供给表面参考和按照。
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