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花生过敏的长久性和沉重性重要感化了人们的生存,而我国事花生消费和耗费的泱泱大国,花生的普遍运用很难制止对花生的食用。在花生过敏中,卵白因素常常是惹起过敏反馈的成分,所以高纯度卵白的索取及其降敏接洽利害常要害的。本考查鉴于卵白的融化性、分子量巨细、电荷等个性,经过离心、积淀、凝胶过滤色谱法等纯化获得活性卵白。并以索取的花生致敏卵白及Arah 1为接洽东西,接洽辐射、酶解对花生致敏卵白生物化学本质的感化,为研制和开拓符合过敏患者运用的低敏或脱敏食物供给表面和本领维持,具备要害的表面价格和实际的运用远景。并对采自各别产区的花生种类举行免疫性原性领会,获得低致敏性或那种致敏卵白缺点和失误的花生种类,为低敏性食物的研制供给物资普通。重要接洽功效如次:1.??????? 按照卵白融化个性辨别获得盐溶性花生致敏卵白和醇溶性花生致敏卵白,进一步对两种融化性的卵白举行硫酸铵分级积淀、等电点分级积淀及葡聚糖凝胶层析,辨别纯化出花生中三种重要致敏卵白Arah 1、Arah 2、Arah 3。2.??????? 辨别用纯化的盐溶性花生致敏卵白、醇溶性花生致敏卵白及Arah 1为抗原,免疫性表露兔,最好包被浓淡均为1×10-4mg/ml,此时,抗原效价平均高度达100000。3.??????? 沿用未脱脂花生粉、完备的花生颗粒、盐溶性花生致敏卵白粉、醇溶性花生致敏卵白粉及Arah 1在水溶液和粉末两种状况下经各别剂量辐射后的分子量领会及抗原性领会创造:居于粉末状况的卵白其分子量没有爆发鲜明的变革,而在溶液状况下卵白分子量爆发鲜明变革(整粒花生之外)。但辐射后卵白与抗原的结协力在各别生存状况下展现各别。4.??????? 采用各别根源的卵白酶挑选贬低花生致敏性的最好用酶,本考查截止表白,各别酶降解进程各别,酶解功效也纷歧。在最好pH、最适温度下,Alcalase、Neutrase、胃卵白酶、木瓜卵白酶、风韵卵白酶的最好酶用量辨别为43.04U、396.8U、57.44U、4.72U、129.6U,底物浓淡辨别为1%、0.25%、1%、0.5%、0.25%以及酶解功夫辨别为4h、4h、4h、8h、4h。贯串控制率考查决定最好用酶为胃卵白酶和Alcalase,木瓜卵白酶酶解功效比拟好,Neutrase、风韵卵白酶的酶解功效较差。在最适前提下对花生颗粒举行酶解创造卵白降解鲜明,这为加工中整粒花生的降敏接洽供给了大概。5.??????? 花生中重要有10种各别分子量的卵白,辨别为61kD、44kD、41kD、37kD、23kD、19kD、17kD、14kD、11kD、8kD的卵白。各别产区的花生其卵白分子量分别不大:除61kD(Arah 1)在22号产区中的卵白含量较低;37kD(Arah 3)卵白在2、16、23、24、25、26号产区中爆发卵白缺点和失误,在20号产区中卵白含量极低。Ci-ELISA领会后:33、34号花生控制率近100%,与抗原有很强的贯串本领;13、25、29、31、32号花生的控制率近20%,其卵白与抗原不妨贯串,并有弱得结协力;其他大局部花生其控制率为负值,卵白与抗原结协力小大概没有结协力,证明花生种类间卵白构造生存确定的分别,
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