论文摘要：实时分析限制性内切酶活性荧光法的研究

蛋白质对DNA的序列特异性作用对于基因信息的维持与表达至关重要。因此，在分子水平上研究蛋白质和DNA生物分子之间的相互作用已成为当前生命科学研究的热点。由于限制性内切酶在很多生命过程中起着重要作用，在研究蛋白质与DNA相互作用时常以其做模式体系。对限制性内切酶抑制剂的研究可为药物发现提供有效工具，尤其是在抗菌和抗病毒药物的发展中。因此，构建简便、可靠检测限制性内切酶活性及筛选抑制剂的方法具有重要的理论及实际意义。本论文以限制性内切酶EcoRI为模式酶，建立了两种实时检测EcoRI活性的荧光法。首先，以SYBR GreenI (SGI)作为信号分子，基于加入限制性内切酶EcoRI前后SGI的信号变化，建立了一种无需标记、简单、实时检测限制性内切酶EcoRI活性的荧光法。其次，以金纳米棒为荧光猝灭剂，基于限制性内切酶EcoRI加入前后，羧基荧光素标记的底物DNA与金纳米棒荧光共振能量转移效率变化，建立了一种简单、响应快、选择性好检测限制性内切酶活性荧光法, 该方法还可用于酶抑制剂的筛选。

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