免费论文摘要：丹参木质素基因肉桂酰辅酶A恢复酶和咖啡茶酰辅酶A-O-甲基变化酶的克隆和功效接洽

丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属有年生草本植被，具备活血祛瘀，通经止痛，清心除烦的工效，在临床上被普遍运用于心血管病症、暗疾及百般炎症的调节。连年来，丹参动作植被次生新陈代谢道路接洽的理念资料，被誉为“形式药用植被”。基于保守国药以水煎服的用丹方式，以迷迭香酸和丹酚酸B为代办的水溶性酚酸类因素被觉得是丹参表现药效的重要活性物资，遭到接洽者们的一致关心。因为丹参水溶性酚酸类因素与木质素新陈代谢公有苯丙烷新陈代谢通路，本接洽以丹参为试验资料，以丹参木质素合成要害酶基因——肉桂酰辅酶A恢复酶SmCCR和丹参咖啡茶酰辅酶A-O-甲基变化酶SmCCoAOMT——为接洽东西，沿用分子底栖生物学和新陈代谢组学的本领，对其在丹参酚酸类因素积聚，木质素合成人中学的效率，举行了接洽，所得截止如次：1. 运用DNA walking，RT-PCR和PCR克隆了2个CCR基因和1个CCoAOMT基因，并运用底栖生物消息学对其举行了功效领会和构造猜测。体例进化树领会创造， SmCCR1和SmCCR2与其余物种根源的CCR均具备较高的同源性，而SmCCR1和SmCCR2具备较远的遗传隔绝。及时荧光定量PCR截止表白，SmCCRs和SmCCoAOMT基因在丹参各构造均有表白，SmCCR1重要在叶中表白，SmCCR2和SmCCoAOMT重要在茎中表白；其表白还遭到MeJA和病原菌XC-1等多种成分的开辟。2. 运用DNA walking进一步克隆了SmCCR1和SmCCoAOMT的1.2 kb和1.3 kb的5’侧翼序列，PlantCare领会其顺式效率元件，创造除含有TATA-box、CAAT-box等真核底栖生物启用子地区的必需元件外，再有MYB贯串位点（MYB binding site），威吓相应元件，荷尔蒙相应元件等一系列效率元件。在此普通上，建立了SmCCR1启用子与AtPAP1融洽的GUS表白载体，运用香烟打针，刹时表白体例，考证SmCCR1启用子与AtPAP1的彼此效率，截止表白：GUS基因在【AtPAP1+P:SmCCR1】中表白量高，估计AtPAP1对P:SmCCR1有径直的激活效率。3. 建立过表白拟南芥AtPAP1转录因子同声干预SmCCR1表白载体，运用叶盘法转染丹参，赢得14个转基因株系。HPLC测定转基因株系丹酚酸B，迷迭香酸含量均有明显性普及；与此同声木质素含量明显贬低，植株矮化；总酚酸，总黄酮较比较也有明显普及。4. 建立了RNA干预的SmCCoAOMT载体，并转染赢得了11个转基因株系，个中有7株的CCoAOMT表白量较比较有鲜明的下调。后期总木质素，木质素单体，水溶性丹酚酸B，迷迭香酸，总酚，总黄酮检验和测定正在举行中。 

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