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谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase,GInS)在底栖生物体内奇异地催化谷氨酸天生谷氨酰胺,是谷氨酸新陈代谢的要害酶。该酶介入保护肌体平常的神经传播,以及受损神经的建设,该酶变异将引导多种神经认知病症爆发。 拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)从属于:虫豸纲(Insecta)、膜翅目(Hymenoptera)、蚁科(Fromicidae)、多刺蚁属(Polyrhachis),是由国度保健部指定的可动作药食两栖的虫豸。拟黑多刺蚁动作典范的社会性聚居生存的虫豸,其重要的生存个性是具等第分裂局面,社会动作十分搀杂,部落里面单干格外精确。其余,该虫豸便于豢养、采集样品,虫体容易辨别、索取,其神经体例莫大搀杂,是很好的用来接洽虫豸成长发育、神经功效接洽的试验众生资料。本试验的接洽资料沿用拟黑多刺蚁各别等第、各别发育阶段的虫体,试验本领则沿用巢氏RT-PCR、3’与5’RACE等克隆出GInS基因的全长cDNA;试验截止领会运用底栖生物消息学本领猜测表白产品卵白质谷氨酰胺合成酶的构造和功效;运用荧光及时定量RT-PCR对立定量本领,接洽谷氨酰胺合成酶mRNA在拟黑多刺蚁各别发育阶段及各别等第虫体之间的表白分别。接洽截止如次: 1、拟黑多刺蚁谷氨酰胺合成酶GInS基因全长1396bp。最大的盛开观赏框为1110bp,源代码369个氨基酸酸,3’非源代码区和5’非源代码区长度辨别为162bp和123bp,3’非源代码区看来典范的加尾旗号AATAA以及19bp的ploy(A)尾。将该基因定名为Pv-GInS,上传到NCBI网站,获得基因的序列号:JQ6790101。 2、应用底栖生物消息学本领翻译出该基因所源代码的氨基酸酸序列,获得猜测的GInS卵白,其分子量42.02kDa,等电点pI5.70。举行同源性领会表露,与其余真核底栖生物物种,更加是虫豸的谷氨酰胺合成酶GInS卵白序列一致度75%安排。构造域领会猜测表露该卵白具备谷氨酰胺合成酶的功效地区,由此可判决赢得的基因恰是拟黑多刺蚁谷氨酰胺合成酶。 3、沿用荧光及时定量本领,对拟黑多刺蚁各别发育阶段毛蚴、各别等第若虫的Pv-GInS在mRNA程度上对立定量的表白接洽。试验数据表露,一切被检样本中均有Pv-GInS的表白。在各别发育功夫的毛蚴中,一龄毛蚴、二龄毛蚴和蛹的表白量较高,差异,卵和三龄毛蚴、四龄毛蚴表白量较低。在各别等第若虫中,兵蚁表白量最高,雄蚁比兵蚁略少,雌蚁极少。
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