免费论文摘要：二氢卟吩e6介导的声能源刺伤白血病细胞及关系体制接洽

白血病是造血体例的恶性病症，是海内十大增发恶性肿瘤之一。暂时，化学药物治疗和骨髓移植仍是白血病调节的常用本领，但常常生存耐药、复发率高、调节期内因熏染惹起早期牺牲等缺陷。所以，探究白血病临床调节的新本领和本领本领是当宿世物医术的接洽热门和亟待处置的宏大题目。声能源疗法（Sonodynamic therapy，SDT）是运用超声激活在肿瘤构造/细胞内奇异性富集并长功夫潴留的卟啉类及其衍底栖生物等声敏剂而爆发共同效力来刺伤肿瘤细胞。SDT疗法具备靶向性好、对平常构造毒品副作用效率小等便宜，在肿瘤调节中具备特殊的上风和潜伏的运用价格。动作第二代光敏剂，二氢卟吩e6（Chlorin e6，Ce6）在肿瘤细胞中具备较好的采用性并能长功夫潴留。已有接洽表明二氢卟吩e6在光能源疗法有确定的抗肿瘤效力，在超声的效率下，二氢卟吩e6也能展现出杰出的SDT抗肿瘤效力。本接洽是在前期处事的普通上，以国度天然科学基金名目为依靠，采用人白血病K562和U973细胞为细胞模子，Ce6为声敏剂，接洽超声贯串Ce6刺伤白血病细胞牺牲形式及其分子体制，为声能源开辟白血病细胞牺牲的细胞底栖生物学体制接洽和临床运用供给了下述有价格的科学按照。1. Ce6在白血病K562和U973细胞中的定量定位接洽：试验经过流式细胞仪检验和测定了Ce6在K562和U973细胞中新陈代谢顺序，截止表白，跟着Ce6浓淡的减少，细胞对其接收量相映减少；同一药物浓淡下，在加药后6 h内，跟着孵育功夫的延迟，Ce6加入细胞中的含量也渐渐增加，当孵育功夫胜过6 h，各浓淡组细胞内的Ce6含量基础不复减少，加入平台期，保护在一个对立宁静的状况。试验沿用激光共聚焦显微镜贯串细胞器奇异性荧光探针接洽了Ce6在细胞内的亚细胞定位，截止表白，Ce6在K562和U973细胞内重要定坐落线粒体。2. 超声贯串Ce6刺伤K562和U937细胞的参数挑选：试验辨别接洽了Ce6浓淡、超声处置强度对离体培植的K562和U937细胞的刺伤效率。截止表白，细胞的对立存活率跟着Ce6浓淡的增大而低沉，20 μg/ml和10 μg/ml Ce6辨别是K562细胞和U937细胞的伤害阈值。超声强度对K562和U937细胞的对立存活率有确定的强度依附性，超声强度越强，其对细胞的伤害越鲜明，2W/cm2的超声强度是K562和U937细胞的伤害阈值。超声贯串Ce6对K562和U937细胞的增殖控制效率在SDT处置后4-24 h的趋向展现普遍，均表露出鲜明的共同刺伤效率。3. Ce6介导的SDT对K562细胞的伤害效率接洽：试验重要接洽了2W/cm2的超声贯串20 μg/ml的二氢卟吩e6共同处置后，K562细胞各别牺牲形式及关系体制领会。①经过扫描电子显微镜和透射电子显微镜查看证明SDT处置后K562细胞的超微构造爆发鲜明变革。②经过流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、Western blot本领检验和测定了SDT处置后K562细胞凋亡的情景，截止表白：流式细胞仪贯串Annexin V-PE/7-AAD试验提醒SDT处置不妨惹起K562细胞爆发凋亡；Rho123染色表露SDT处置后0.5 h，K562细胞的线粒体膜电位明显低沉，随孵育功夫的推迟，膜电位渐渐回复；荧光显微镜贯串DAPI染色表露SDT处置后细胞核展示鲜明的凋亡核特性；激光共聚焦显微镜查看创造SDT处置后0.5 h-2 h，Bax由胞浆转定位到线粒体；Western blot检验和测定SDT处置后凋亡关系卵白的表白变革表露Caspase-8，Caspase-9，Caspase-3被水解活化，PARP展示鲜明的89 KDa的剪切片断，提醒SDT处置大概触发了K562细胞Caspase依附性凋亡爆发。③经过Western blot、透射电子显微镜、基因转染及激光共聚焦显微内窥镜检查测了SDT处置后K562细胞自噬的爆发，截止表白：SDT处置后0.5 h时，自噬关系卵白LC3由I型向II型变换局面最为鲜明；透射电子显微镜查看到SDT处置组细胞内有自噬泡生存；SDT处置后，eGFP-LC3转染的K562细胞中展示更多的绿色荧光会合或缺点和失误地区，提醒LC3蛋鹤发生重散布介入自噬，且SDT开辟的K562细胞自噬与线粒体关系。④经过Western blot接洽SDT处置对MAPK通路关系卵白表白变革的感化，截止表白：SDT处置后0.5 h，K562细胞中p38 MAPK卵白的盐酸化程度鲜明减少，而后在2 h内赶快回复到平常程度。而p38 MAPK卵白表白程度在SDT处置前后简直无任何鲜明变革。其余，SDT效率后0.5 h，JNK旗号通路赶快活化，JNK的盐酸化程度鲜明增高，且其上流活化因子MKK4，卑劣效率底物c-Jun、ATF-2的盐酸化水平衡鲜明巩固。在ERK旗号通路中，居于MAPKK场所的MEK1/2的盐酸化程度在处置后0.5 h到2 h之间保护稍高程度，在SDT处置 4 h之后渐渐回复到与比较组十分的程度，而MEK1/2自己的卵白表白程度在SDT处置后各别功夫点基础保护静止；居于MAPK场所的ERK1/2的盐酸化程度在SDT处置后各别功夫点稍有巩固，而且ERK卵白在SDT处置后4 h鲜明低沉，提醒SDT大概经过控制ERK道路来控制K562细胞增殖。4. Ce6介导的SDT对U937细胞的伤害效率接洽：试验重要接洽了2W/cm2的超声贯串10 μg/ml的二氢卟吩e6处置后U937细胞凋亡及关系体制领会。①经过扫描电子显微镜和透射电子显微镜查看证明SDT处置后U937细胞的超微构造爆发鲜明的变革。②经过流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、Western blot检验和测定了SDT处置后U937细胞凋亡的情景，截止表白：SDT处置后，ViaCount检验和测定U937细胞存活率仅为50.1%；Annexin V-PE/7-AAD检验和测定表露SDT处置后，U937细胞凋亡率为41.3 %；罗丹明123检验和测定线粒体膜电位表露，SDT处置后0.5 h，U937细胞线粒体跨膜电位鲜明低沉，1 h时，膜电位低沉最为明显，之后渐渐回复；DAPI染色表露SDT处置后U937细胞核爆发鲜明变革；Western blot检验和测定SDT处置后凋亡关系卵白PARP的表白变革表露，SDT处置后2 h，PARP展示鲜明的剪切片断，且此局面从来连接到处置后24 h。③经过Western blot接洽SDT处置对MAPK通路关系卵白表白变革的感化，截止表白：p38 MAPK的盐酸化程度于SDT后0.5 h便发端升高，2 h达顶峰，8 h内保护较高程度，随后渐渐低沉；JNK盐酸化程度于SDT处置后0.5 h发端升高，之后便渐渐低沉，于SDT后24 h回复到与比较组十分的程度；JNK的上流活化因子MKK4及其卑劣效率底物c-Jun、ATF-2的盐酸化程度在SDT处置后0.5 h均有各别水平的巩固；在SDT处置后0.5 h，ERK1/2的盐酸化程度鲜明升高，之后赶快低沉，而且ERK 1的盐酸化程度高于ERK2；SDT处置对总ERK1/2表白程度基础无感化，而ERK上流激酶MEK在SDT处置后0.5-2 h之间盐酸化程度对立比较组也有升高，4 h后贬低至与比较组十分的程度，而MEK总体表白程度在声能源处置后保护静止。④ MAPK各别旗号转导道路中奇异性控制剂对声能源处置U937细胞存活率的感化截止表白：p38MAPK旗号通路控制剂SB203580能惹起Ce6-SDT开辟的U937细胞存活率的升高；JNK 旗号转导通路控制剂SP600125 能贬低SDT开辟的U937细胞毒效力；ERK上流激酶 MEK1/2的控制剂PD98059对Ce6-SDT开辟U937细胞存活率的变革感化不鲜明，略微巩固了声能源的细胞毒效力；ERK盐酸化控制剂U0126巩固了Ce6-SDT开辟的U937细胞存活率低沉。⑤创造U0126巩固SDT开辟U937细胞毒效力大概与其巩固了SDT组细胞内ROS爆发和线粒体伤害关系。

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