免费论文摘要：拟黑多刺蚁酪氨酸羟化酶（TH）和多巴脱羧酶（DDC）的克隆及其mRNA程度在发育中的表白接洽

多巴胺（dopamine, DA）动作一种普遍生存生人和众生脑中要害的神经递质，介入肌体的疏通及神经内渗透的安排，并与多种神经体例病症爆发相关。多巴胺能神经元可接收血液中的L-酪氨酸，后者在胞浆内被酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase, TH）催化天生L-多巴（L-dihydroxy phenylalanine, L-dopa），再经多巴脱羧酶（dopa decarboxylase, DDC）效率天生多巴胺。拟黑多刺蚁（Polyrhachis vicina Roger）是一种典范的社会性虫豸，从属于膜翅目（Hymenoptera），蚁科（Formicidae），多刺蚁属（Polyrhachis）。拟黑多刺蚁具备精确的社会性特性，如特殊的等第分裂、搀杂的动作震动、单干精确等；是接洽虫豸发育、动作调节和控制体制等上面要害的资源虫豸。本试验以拟黑多刺蚁为接洽东西，沿用RT-PCR及RACE本领从拟黑多刺蚁体内克隆赢得TH和DDC的全长cDNA序列；并对其核苷酸序列和卵白序列举行底栖生物消息学领会；经过及时定量RT-PCR本领对拟黑多刺蚁各别等第脑部、各别等第浑身、各别发育阶段虫体、Y迷宫进修回顾演练前后兵蚁脑部TH和DDC mRNA表白程度举行对立定量接洽；运用原位杂交本领对各别等第脑部、动作演练前后兵蚁脑部TH和DDC mRNA表白程度举行定位接洽。接洽截止如次：1.  拟黑多刺蚁TH cDNA序列全长2429bp，包括一个长度为1713bp的盛开观赏框（open reading frame，ORF），源代码570个氨基酸酸残基，源代码的卵白质分子量为65.09kDa，等电点pI=5.26，5’端非源代码区（5’-UTR）长度为357bp，3’-UTR为359bp。同源领会表白该卵白与金小蜂、意大利蜜蜂、赤拟谷盗、家蚕等一致度都在70%安排，以至与鱼类、喂奶类囊括大鼠和生人在卵白质序列上都有50%之上的一致性。应用底栖生物消息学领会，TH卵白头等氨基酸酸序列包括的很多功效基序消息以及CD（conserved domain）顽固区猜测的功效区与其余物种THs卵白序列都是莫大顽固的。所以，不妨决定本试验克隆所得序名列拟黑多刺蚁TH全长cDNA序列，定名为PvTH并上传至GenBank，赢得序列号AEC14314。2.          沿用荧光及时定量RT-PCR本领对拟黑多刺蚁各别发育阶段、各别等第蚂蚁浑身、各别等第蚂蚁脑部及Y迷宫演练前后兵蚁脑部PvTH mRNA举行对立定量接洽。截止表白，PvTH在各个功夫和各个等第中均有表白。对拟黑多刺蚁发育阶段接洽表白，PvTH在蛹期表白量最高，四龄毛蚴期最低。在若虫阶段，兵蚁表白量最高，雌蚁最少，且表白量具备明显的分别。在三个等第蚂蚁脑部的比拟中，兵蚁表白量最低，雄蚁和雌蚁表白量都较高。这种表白的分别性大概与TH在各别发育阶段及各别等第蚂蚁肌体所表现的效率相关。对Y迷宫演练前后兵蚁脑部的表白量举行比拟创造演练后兵蚁脑部TH的表白量较未演练的高。这种表白的分别性大概与蚂蚁的进修动作相关。3.          对拟黑多刺蚁各别等第脑部PvTH mRNA沿用地高辛标志奇异性寡核苷酸探针原位杂交本领举行定位接洽，截止发此刻视叶、嗅叶及Keyron细胞等部位都有较强的阴性反馈。雄蚁的视叶的阴性反馈最强，雌蚁、雄蚁中心复合体阴性反馈较强。兵蚁嗅球和蕈形骸表白程度对立较高。TH在各别等第蚂蚁脑部表白的分别性反应了TH大概在各别等第蚂蚁社会单干中表现的效率各别相关。Y迷宫演练后，兵蚁脑部视叶、嗅叶及中心复合体与未演练的兵蚁脑部比拟，均有较强的阴性表白。估计经过进修演练大概激动TH的量减少，而TH大概与蚂蚁的进修回顾相关。4.          拟黑多刺蚁DDC cDNA序列全长1893bp，包括1443bp的盛开观赏框，源代码480个氨基酸酸残基，源代码卵白质的分子量为54.60kDa，等电点pI=6.38，5’UTR71bp，3’UTR379bp。同源领会表白该卵白与意大利蜜蜂、金小蜂、赤拟谷盗等有75%安排的一致性。DDC卵白头等氨基酸酸序列包括的很多功效基序消息及CD顽固区猜测的功效区与其余物种DDCs卵白序列莫大顽固。所以决定本试验克隆所得序名列拟黑多刺蚁DDC全长cDNA序列，定名为PvDDC。上传至GenBank，赢得序列号JN979785。5.          沿用荧光及时定量RT-PCR本领对拟黑多刺蚁各别发育阶段，各别等第蚂蚁浑身，各别等第脑部及Y迷宫演练前后兵蚁脑部PvDDC mRNA举行对立定量接洽。截止表白，PvDDC在拟黑多刺蚁各功夫和等第中均有表白。在发育阶段对立及时定量的接洽中创造，蛹期表白量最高，卵最低。对若虫阶段PvDDC的定量领会创造，雄蚁表白量最高，兵蚁较雄蚁低，雌蚁最少。估计其与各别等第和阶段虫体所需的DDC的量的分别性相关。三个等第脑部接洽创造雄蚁和雌蚁表白量较高，兵蚁最低。Y迷宫演练后兵蚁脑部的表白量高于未演练的兵蚁。估计DDC大概介入了蚂蚁的进修回顾。6.          沿用原位杂交本领对拟黑多刺蚁各别等第脑部DDC mRNA定位接洽，截止表白DDC在拟黑多刺蚁脑部表白普遍，蕈形骸、视叶和中心复合体中都有阴性反馈。雄蚁视叶具备较高程度表白。兵蚁嗅球内有对立较强的阴性反馈。Y迷宫演练后定位接洽表白，演练后兵蚁脑部的DDC在蕈体冠、蕈体柄、视叶都有较未演练的兵蚁较强的阴性反馈。这大概与各别等第拟黑多刺蚁的动作相关，由此估计DDC大概介入了拟黑多刺蚁的进修回顾。本接洽初次克隆赢得膜翅目虫豸拟黑多刺蚁TH和DDC的全长cDNA序列，并上传GenBank；对立及时定量截止表白，PvTH和PvDDC mRNA在拟黑多刺蚁个别各别发育阶段及若虫脑部具备表白，证明这两个基因的表白产品与虫豸的发育和进修动作关系。原位杂交本领接洽创造这两个基因的mRNA在三个等第脑部有分别性表白，进一步证明其与虫豸进修动作、神经和肌体发育的关系性。那些截止将为深刻商量虫豸TH和DDC的简直功效奠定普通。

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