免费论文摘要：过表白AtPAP1转录因子并同声RNA干预SmCOMT基因对丹参酚酸类因素积聚的感化

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是我国的大量药材之一，其灵验因素被制成多种底栖生物药剂用来临床调节，已博得杰出医疗效果。跟着丹参商场需要的连接夸大，丹参资源求过于供。沿用药用植被细胞工程、基因工程和新陈代谢工程等新颖底栖生物本领普及丹参次生新陈代谢产品含量、培养崇高种类，仍旧变成处置丹参供需冲突和赢得优质高产稳产丹参新品系的有力本领。丹参的重要次生新陈代谢产品可分为脂溶性的丹参酮类和水溶性的酚酸类，个中迷迭香酸和丹酚酸B等酚酸类活性因素被觉得是丹参中表现药理活性的物资普通。Zhang等接洽发此刻丹参中过表白AtPAP1可明显普及迷迭香酸和丹酚酸B等酚酸类活性因素的含量；刘晓晶等人接洽创造，RNA干预木质素合成要害酶COMT的转基因丹参植株中，总木质素和木质素单体的含量均有各别水平的低沉，使本来合成木质素的新陈代谢流偏差天生酚酸类活性因素，进而使迷迭香酸和丹酚酸B的含量均有各别水平的普及。基于此，本接洽将建立过表白AtPAP1转录因子并同声RNA干预SmCOMT基因的表白载体并转入丹参，以期进一步普及丹参中酚酸类活性因素的含量，挑选出崇高丹参株系，为丹参活性因素合成接洽及分子育种奠定普通。重要接洽实质及论断如次：1. 沿用PCR及酶切本领胜利建立了过表白AtPAP1转录因子并同声RNA干预SmCOMT的重组载体PCO；经过根癌农杆菌介导法变化丹参，再过程潮霉素抗性的挑选，最后赢得30株转PCO载体丹参株系；2. 沿用PCR本领检验和测定了转PCO载体丹参株系，赢得23个外源转录因子AtPAP1和SmCOMT目的片断均已宁静调整到丹参染色体上的转基因株系；沿用及时荧光定量PCR本领辨别检验和测定了AtPAP1和SmCOMT在转PCO载体各丹参株系中的表白程度，截止表露：PCO-1、PCO-2、PCO-3、PCO-4、PCO-10、PCO-13、PCO-16、PCO-17、PCO-18和PCO-25等10个株系外源AtPAP1转录因子的表白明显高于比较株系，个中PCO-17株系的表白量最高，约为比较株系的286.03倍；同声除PCO-15、PCO-19和PCO-28除外的20个转PCO丹参株系SmCOMT基因的表白明显低于比较株系，个中PCO-25株系的表白量最低，约为比较株系的5.08%。3. 沿用HPLC本领检验和测定了3月龄转PCO载体丹参株系中酚酸类活性因素的含量，截止表露：7个转PCO载体丹参株系的丹酚酸B含量均明显高于比较株系，个中PCO-17、PCO-18和PCO-25也高于仅过表白AtPAP1转录因子的丹参株系PAP1-14；7个转PCO载体丹参株系的迷迭香酸含量平均高度于仅过表白AtPAP1转录因子的丹参株系PAP1-14，但惟有PCO-18和PCO-25明显高于比较株系。所以，在PCO-18和PCO-25株系中实行了丹酚酸B和迷迭香酸的明显上调，赢得了崇高的转基因丹参株系。4. 沿用构造化学染色法检验和测定了各丹参株系老练茎香港中华总商会木质素和S型木质素的含量，截止表露二者在转PCO载体丹参株系中的含量均有各别水平的低沉。沿用Klason法和紫外分光灯光法检验和测定各丹参株系根中Klason木质素和酸溶性木质素的含量，截止表露：与比较株系比拟，除PCO-1除外的6个转PCO载体丹参株系Klason木质素的含量均明显低沉，酸溶性木质素的含量无明显分辨。沿用变革的thioacidolysis法检验和测定各丹参株系根中木质素单体的构成和含量，截止表露：转PCO载体丹参株系PCO-10和PCO-2第5中学S型木质素和G型木质素的含量均明显低于比较株系，而H型木质素的含量变革不大；同声S/G的比值和木质素单体的总量(H+G+S)也均明显低沉。5. 沿用及时荧光定量PCR本领检验和测定丹参次生新陈代谢道路中要害酶基因的表白程度，截止表露：在PCO-25株系中，酚酸类活性因素合成的关系基因PAL、C4H、HPPR和RAS的表白量均有所上调，TAT基因的表白量无明显分辨，4CL基因的表白量下调；木质素合成的要害酶基因CCR明显下调；类黄酮合成的要害酶基因F3’H和F3’5’H的表白量也爆发了确定的变革，但无顺序性。

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