免费论文摘要：丹参基因SRP和拟南芥同源基因AT2G17350的功效接洽

丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）是唇形科鼠尾草属有年生草本药用植被，在华夏普遍培植，国药丹参在临床上被普遍用来心血管病症和百般炎症的调节等。暂时，因为丹参野生产资料源妨害日益重要，药用需要日益加大，所以对于丹参品质接洽日趋遭到关心。跟着分子底栖生物学试验本领的超过与兴盛，对于丹参分子底栖生物学的接洽也渐渐打开，丹参基因功效接洽平台也渐渐被搭建，这为接洽丹参的次生新陈代谢和底栖生物量关系基因奠定了普通。本接洽在早期创造的丹参EST数据库中，挑选出了一条高丰度表白的未知基因SmSRP，对该未知基因的表白及调节和控制特性举行接洽。贯串拟南芥同源基因AT2G17350的底栖生物消息，并经过over-expression和RNAi基因等试验本领，赢得一系列丹参和拟南芥转基因植株，并对转基因株系和渐变体举行表型领会和总卵白测定，同声贯串酵母双杂交和BiFC的本领，发端证明该未知基因在丹参和拟南芥的功效，为该未知基因的功效进一步接洽供给了按照和奠定了普通。简直接洽实质如次：1.       经过对丹参窘境威吓的EST数据库中表白丰度的领会，赢得了含有376个正片，占库中比率3.33 %的一条序列，暂定名为SmSRP（Salvia miltiorrhiza stress-response protein）。序列比对截止创造该基因在植被中一致生存，但其在一切物种中功效均未知。SmSRP基因具备两个内含子，拟南芥同源基因AT2G17350仅有一个内含子。ORF共源代码117个氨基酸酸，富含精氨酸，谷氨酸和赖氨酸等酸碱性氨基酸酸。丹参SRP和AT2G17350均能经过原核表白的本领表白完备卵白，该卵白不具旗号肽，没有膜锚定或跨膜构造域，没有miRNA猜测位点，α-电钻为其重要的二级构造，占72.65 %。2.       运用及时荧光定量PCR领会SmSRP的表白和调节和控制，创造SmSRP明显相应百般底栖生物或非底栖生物威吓，短功夫内，低平静脱水等均能刺激该基因表白上调，长功夫威吓下其基因表白遭到控制，SmSRP不生存节奏相应，但对于长功夫暗淡和高温连接主动相应。丹参中健将萌生前期洪量表白，后期在完全叶中洪量表白，各别构造中世的表白量最高。同样在拟南芥该同源基因AT2G17350的及时荧光定量PCR领会也考证了此论断，与在线数据库截止相普遍，AT2G17350在健将萌生和胚产生进程中洪量表白，其在完全叶和花构造中表白量最高，但不明显相应百般威吓。3.       经过DNA Walking的本领克隆赢得了SmSRP基因的5’侧翼序列，经过网上数据库赢得了拟南芥AT2G17350的启用子序列，经过在线软硬件领会了其顺式效率元件，发此刻丹参中生存4个胚乳奇异性相应元件和局部非底栖生物源威吓关系的顺式效率元件和荷尔蒙应答元件，而拟南芥中仅有一个胚乳相应元件和小批荷尔蒙应答元件。经过删减启用子变化丹参领会发此刻丹参启用子中序列越长，GUS活性越高。经过变化拟南芥领会创造：该基因启用子在花中表白量最高，在花托、雌蕊花柱和雄蕊花丝、花粉和其余构造嫩叶、芽中表白量尤为明显。4.       经过农杆菌介导的转基因本领赢得丹参SmSRP基因 RNAi植株，定植暖房180天下上局部底栖生物量鲜明小于WT，地下局部二者分别不大，但地上局部总卵白含量明显缩小。而在拟南芥渐变体中接洽创造，该基因渐变体没辙赢得纯合体植株。后期杂合体自交爆发的后辈中杂合体：WT辨别比稍小于2：1，杂合体没有鲜明的表型分别，但总卵白含量缩小。经过在拟南芥中过表白和RNAi该基因，创造转基因植株T1代办型没有明显分别，然而过表白植株香港中华总商会卵白含量减少，RNAi植株香港中华总商会卵白含量缩小。5.       经过酵母双杂交试验创造，拟南芥同源基因AT2G17350源代码卵白与AT3G25980（MAD2，纺锤体安装检查点卵白），AT4G02150（一种卵白转运和绑类卵白质IMPA-3），AT4G16143（IMPA-2），AT5G65940（CHY，3-羟异丁酰-CoA水解酶）大概具备彼此效率，经过BiFC证明咱们的试验截止。而渐变体试验进一步表明AT2G17350与四个基因旗号通路效率办法各有各别。按照之上截止，咱们估计拟南芥AT2G17350源代码卵白经过感化在胚发育等进程中细胞的有丝分割和减数分割，以及与CoA关系能量ATP的水解和恢复等，或感化某些卵白的转运或绑定等来变换对拟南芥成长发育。

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