免费论文摘要：丹参丙二烯氧化学物理环化酶（SmAOC1）基因的发端接洽

国药丹参是我国保守的大量药材之一，以唇形科鼠尾草属丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的枯燥根及根茎入药，具备活血调经、凉血消痈、宁安心神等工效，被普遍用来心血管、肝强硬、肾炎、月信不融合心烦不眠等临床病症的调节。丹参的重要灵验因素囊括脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类，个中水溶性酚酸类复合物以迷迭香酸和丹酚酸B为代办，是调节血汗管病症的重要活性因素。连年来，跟着植被功效基因组学的兴盛，丹参被动作药用植被次生新陈代谢产品合成及其调节和控制接洽的理念资料，而被誉为“形式药用植被”。跟着对丹参原药材需要的日益夸大，培养活性因素含量高的崇高丹参新种类已变成丹参原药材消费中亟待处置的要害题目之一。关系接洽表白，要害酶基因的适量表白使得目的产品合成道路上的瓶颈反馈被冲破，新陈代谢流更多地往目的产品合成目标震动，进而使得目的产品适量积聚。丙二烯氧化学物理环化酶（allene oxide cyclase, AOC）为茉莉花酸合成道路上的限制速度酶，接洽其对于普及丹参的酚酸类因素的含量有要害意旨。鉴于此，本接洽在丹参中过表白AOC基因，以期此普及丹参内源茉莉花酸含量，进而最后普及丹参重要酚酸类活性因素的含量。本接洽的重要实质及论断如次：1. 运用Bio Edit软硬件对本试验建立的丹参转录组数据序列车检查索获得的丹参AOC一致序列并举行序列片断的拼接，赢得1条拼接序列，经在线东西ORF finder步调猜测创造，序列含有完备的盛开观赏框。按照拼接序列安排奇异性引物，沿用RT-PCR本领，赢得全长序列，将其定名为SmAOC1（GenBank：JF682783）。经过底栖生物消息学领会得悉，该基因cDNA 全长为 970 bp， 共源代码 239 个氨基酸酸，属于不宁静卵白。同源性领会表白，SmAOC1与已在NCBI备案的根源于其余植被的AOC基因源代码的氨基酸酸序列具备较高同源性且与香烟NtAOC和西红柿中LeAOC的一致度高达均为79%。2. 及时荧光定量PCR领会了SmAOC1基因的构造表白形式。截止表白，SmAOC1在丹参根中表白量最高，花中的表白量对立较低，而且SmAOC1基因在外源MeJA开辟、UV处置、低温威吓和干旱窘境处置后，该基因表白量明显上调（p3. 经过PCR及控制性内切酶酶切的本领建立过表白SmAOC1的植被载体SmAOC1-1302。经过根癌农杆菌介导的叶盘法变化丹参，经过抗性挑选赢得8个丹参阴性变化株系，个中AOC1-2，AOC1-4和AOC1-7三个株系中SmAOC1表白量最高。4. 为了进一步商量SmAOC1基因的表白变革对丹参酚酸类因素合成道路的感化，咱们沿用RT-PCR本领，对转基因株系及比较株系丹参水溶性次生新陈代谢道路中的6个要害酶基因举行定量领会。截止表露：所检验和测定的酚酸类合成道路的关系基因在转基因株系AOC1-2、AOC1-4及AOC1-7中均有各别水平的变革，个中PAL和TAT的上调最大，证明在新陈代谢通路中产品的积聚对立较多；而迷迭香酸合成关系基因RAS却无明显性分别。5. 沿用HPLC的本领检验和测定30 d实生苗的阴性转基因株系酚酸类因素变革。截止表露：对立于比较株系，转基因株系中迷迭香酸无明显性分别。丹酚酸B含量明显普及，其最高含量是比较株系的1.82倍（P 经过本接洽为探究高效调节和控制丹参灵验活性因素的本领，为挑选丹参灵验活性因素含量明显普及的崇高丹参资源，以及普及丹参活性因素的含量、分子育种及品质遏制的接洽奠定了普通。

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