免费论文摘要：丹参JAZ基因在茉莉花酸开辟酚酸类物资积聚中的功效接洽

丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属有年生草本植被，具备凉血消痈，通经止痛，除烦补血等工效，普遍用来心血管病症的提防和调节。丹参的重要活性因素囊括脂溶性的丹参酮类复合物和水溶性的酚酸类复合物。连年来，跟着丹参原药材商场的需要量日益减少以及药用植被新颖化接洽的连接兴盛，丹参的次生新陈代谢产品的合成及其调节和控制接洽越来越遭到人们的关心，丹参已变成接洽药用植被次生新陈代谢工程的理念资料，被誉为“形式药用植被”。当植被遭到底栖生物或非底栖生物的压力威吓时，植被体内会洪量积聚零落酸、水杨酸、茉莉花酸（jasmonic acid，JA）等植被荷尔蒙，那些植被荷尔蒙再经过相映的旗号转导体例不妨开辟次生新陈代谢产品的合成，以保卫外界刺激。茉莉花酸甲酯（Methyl jasmonate，MeJA）等植被荷尔蒙对次生新陈代谢产品合成的调节和控制效率已被人们所认可，并普遍运用于激动植被中次生新陈代谢产品积聚等上面。丹参中的接洽表白，茉莉花酸的衍底栖生物茉莉花酸甲酯动作外源开辟子可激动丹参次生新陈代谢产品的洪量积聚；运用基因工程本领既可普及丹参内源MeJA含量，也能激动多种次生新陈代谢产品在丹参中的积聚。暂时，茉莉花酸及其衍底栖生物在形式植被拟南芥中的旗号转导通路已较为领会，jasmonate ZIM-domain（JAZ）卵白为茉莉花酸旗号通路上的要害分子，与茉莉花酸开辟的花青素合成，毛状体爆发等均关系，在香烟中也有接洽证领会JAZ卵白在茉莉花酸调节和控制次生新陈代谢产品尼古丁的合成及积聚中具备要害效率， JAZ卵白的创造为探究茉莉花酸开辟丹参活性因素积聚，供给了新的接洽突破点及目标。基于此，本接洽以茉莉花酸旗号道路要害分子JAZ卵白为接洽东西，沿用基因工程本领，在表明SmJAZ卵白介入了丹参茉莉花酸旗号转导通路的普通上，深刻接洽其在茉莉花酸开辟丹参酚酸类因素积聚中的简直功效，为药用植被次生新陈代谢产品调节和控制接洽供给了新的目标和思绪。本接洽的重要截止及论断如次：1.        经过Blast比对领会本试验室已创造的丹参转录组数据库，赢得2个有完备盛开读码框（open reading frame，ORF）的JAZ基因及2个具备局部ORF 的JAZ基因序列，辨别定名为SmJAZ1、SmJAZ8，SmJAZ2、SmJAZ3，相映的氨基酸酸序列领会表白4条丹参JAZ基因均包括有JAZ卵白顽固的ZIM构造域和Jas构造域。运用Real-time PCR举行器官表白形式领会表白，SmJAZs基因在根茎叶中花均有表白，除SmJAZ3在根中表白量较高，其它3条SmJAZs均在茎或叶中表白量较高。运用BD walking 的本领克隆了SmJAZ1和SmJAZ8基因的5’侧翼序列，辨别长为1308 bp和2134 bp，Plantcare软硬件领会表露其启用子区包括有多种荷尔蒙及威吓关系顺式效率元件。及时荧光定量PCR的截止同样表白，SmJAZs基因的表白遭到茉莉花酸甲酯、板滞妨害、零落酸、赤霉素等多种成分的开辟。2.        Jas构造域一致生存于JAZs卵白中，为莫大顽固序列，是JAZ卵白的活性功效区。建立过表白JAZ基因全长载体pJAZ1、pJAZ8，缺点和失误JAZ卵白要害功效区Jas构造域的截短型表白载体pSJAZ1、pSJAZ8，以及按照ZIM构造域和Jas构造域内的顽固序列安排RNA干预序列，建立JAZ基因家属干预载体piJAZ、piCO-TJ。运用根癌农杆菌介导的叶盘变化法转染丹参叶片，经DNA及RNA程度的检验和测定，共赢得转SmJAZ1基因全长的丹参高表白阴性株系（OEA）及转SmJAZ8基因全长的丹参高表白阴性株系（OEB）3个及4个，转SmJAZ1截短型序列的高表白阴性株系（OEAS）及转SmJAZ8截短型序列的高表白阴性株系（OEBS）各4个，以及5个干预ZIM构造域的共干预株系（ir）和4个干预序名列顽固区tify基序和Jas基序的共干预株系（coir），为SmJAZs基因功效接洽供给了杰出的植被资料。3.        经过领会野生型和转基因株系香港中华总商会酚酸、总黄酮含量及抗氧化活性，截止表露：转SmJAZ8基因全长的阴性株系OEB总酚、总黄酮含量及抗氧化活性辨别是比较的1.91~2.50倍、1.49~1.96倍及1.59~1.96倍；转截短型JAZ8基因阴性株系OEBS则与比较丹参没有明显性分别（P>0.05）；RNAi-JAZ干预阴性株系ir总酚、总黄酮含量较比较均有明显的贬低（P4.   沿用HPLC的本领检验和测定30 d实生苗龄的阴性转基因株系中酚酸类因素变革，截止表白：OEB转基因株系根中丹酚酸B含量最高可达78.74 ± 1.48 mg/g，是同功夫比较株系的1.4倍（P 0.05）。进一步经过及时荧光定量PCR的本领领会阴性株系中，丹参酚酸类活性因素底栖生物合成道路上的PAL、C4H、4CL、RAS等要害酶基因的表白量变革，截止表白OEB转基因株系中那些合成道路上的关系基因均有各别水平的上调，而OEBS转基因株系中关系基因表白量变革不鲜明（P>0.05）。5.   在培植基中增添外源MeJA，检验和测定比较植株和转基因株系对MeJA的相应分别，经过领会生根程度、成长状况、JA相应基因表白量及次生新陈代谢产品含量等多个茉莉花酸相应事变，截止表白过表白JAZ8全长的OEB转基因株系展现出局部相应茉莉花酸表型的缺点和失误，囊括茉莉花酸对根成长的控制效率缩小，茉莉花酸相应基因表白量变革不鲜明，以及茉莉花酸开辟的次生新陈代谢产品合成缩小等，使转基因丹参变成茉莉花酸不敏锐型植株，而缺点和失误Jas构造域的截短型过表白转基因株系OEBS则展现出与比较一致的相应情景。本接洽经过多种转基因事变证领会，丹参JAZ基因不妨负调节和控制丹参茉莉花酸旗号道路，而且丹参JAZ卵白中的Jas构造域是其介入调节和控制茉莉花酸旗号通路的顽固构造。同声，经过遗传变化的本领赢得了次生新陈代谢产品含量普及的变化植株，证明SmJAZ8基因的表白可激动丹参酚酸类物资的积聚，证领会SmJAZs在丹参中的简直功效，估计SmJAZs对丹参次生新陈代谢产品合成的正调节和控制效率很大概是经过茉莉花酸旗号的转导来实行。所以，本接洽为茉莉花酸开辟药用植被中次生新陈代谢产品积聚供给了新的接洽突破点，也为证明丹参中茉莉花酸旗号道路及酚酸类合成道路的偶联奠定了普通。

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