免费论文摘要：甘肃鼢鼠(Myospalax cansus)EPO基因克隆及其mRNA在脑构造的表白接洽

甘肃鼢鼠(Myospalax cansus)为我国西北黄土高原私有的喂奶众生，终生营庄重的地下洞道生存，生存情况低O2高CO2，长久地下生存，使其产生了一系列的特殊符合体制，是接洽低氧符合体制的理念形式众生。接洽表白，甘肃鼢鼠经过红细胞增殖及血红卵白的洪量合成来普及血液载氧本领，缩小低氧妨害，红细胞天生重要受促红细胞天生素(erythropoietin，EPO)的调节和控制，EPO经过刺激骨造血功效，减少红细胞数目进而普及血液携氧本领和巩固肌体对氧的运用，普及低氧耐受，而低氧是激动EPO天生的要害成分。Shams等(2004)对盲鼹鼠(Spalax) EPO和低氧开辟因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)的接洽表白，地下鼠在基因程度也展现出对地下低氧情况的符合。连年接洽也创造，核心神经体例中也有EPO及其受体的表白，具备多种神经养护效率，神经元的很多功效受EPO调节和控制，EPO仍旧被觉得是核心神经系一致个新的旗号转导分子。本舆论以甘肃鼢鼠为接洽东西，经过及时定量RT-PCR本领对EPO基因在甘肃鼢鼠和SD鼠脑构造的mRNA表白程度举行对立定量接洽；经过RT-PCR本领克隆甘肃鼢鼠EPO基因的全长cDNA序列；经过底栖生物消息学本领对赢得的EPO卵白序列举行领会。接洽截止如次：1.沿用荧光及时定量RT-PCR法对甘肃鼢鼠和SD大鼠脑构造各别低氧前提下EPO mRNA表白程度举行对立定量领会。截止表露，甘肃鼢鼠脑构造EPO mRNA常氧前提下的表白量最低，慢性低氧表白程度明显减少，中断耐性低氧较慢性低氧明显低沉，但高于常氧；SD大鼠常氧表白量最低，慢性低氧表白程度对立常氧极明显减少，中断耐性低氧前提下表白程度对立慢性低氧极明显减少。证明甘肃鼢鼠EPO表白受低氧感化较小，具备杰出的低氧耐受力，对低氧刺激不敏锐，能经过赶快反应体制保护肌体在低氧情况下的平常心理功效。由此估计，甘肃鼢鼠比SD大鼠更能灵验安排肌体的反应体制符合低氧。因为EPO在核心神经体例具备多种神经养护效率，甘肃鼢鼠比SD大鼠更符合低氧从而缩小低氧对脑构造的伤害，这对咱们接洽EPO在脑构造中效率的分子体制奠定了普通，它们之间表白的各别，大概是由于EPO分子构造的各别。2.甘肃鼢鼠EPO基因cDNA序列全长为579bP片断，与高原鼢鼠 (Eospalax baileyi)EPO基因的cDNA序列同源性达99%。所以，决定该序名列甘肃鼢鼠EPO基因的cDNA序列。经过盛开观赏框搜索东西(ORF Finder)猜测盛开观赏框，其包括一个长度579bP的盛开观赏框，共源代码192个氨基酸酸残基。所以，决定该cDNA序名列EPO基因的全长cDNA序列，能源代码一个完备的EPO卵白质序列，可举行后续试验及数据领会。3.底栖生物消息学领会EPO卵白序列。生化本质领会表露，EPO的对立分子量为21357.8Da，表面等电点pl=7.64，分子式为C960 H1543 N257O276S8，旗号肽领会表露，该卵白具备旗号肽位点，证明该卵白属于渗透型卵白；对该卵白功效基序举行领会，创造该卵白序列具备多个功效位点，重要囊括3个N-糖基化位点、2个酪卵白激酶II盐酸化位点、1个细胞黏附序诸位点和1个促红细胞天生素/促血小板天生素旗号位点；二级构造领会表白，EPO属于all-alpha型；三级构造领会截止表白，与EPO卵白最配合的沙盘是1buyA，最好比对地区坐落EPO卵白序列的第27-192位氨基酸酸残基，序列普遍性达80.12%，e值为4.54e-70。EPO的空间构象由4个α-电钻束（HelixA，HelixB，HelixC，HelixD）和贯穿它们的3个环肽链结(LoopAB，LoopBC，LoopCD)构成。ClustalX同源性比较截止表白，甘肃鼢鼠EPO氨基酸酸序列与高原鼢鼠、以色列盲鼹鼠等地下鼠同源性最高，与仓鼠、根田鼠、人等的同源性较低；固然甘肃鼢鼠、高原鼢鼠属于鼢鼠亚科，四种盲鼹鼠属于鼹形鼠亚科，但EPO进化树表白，这两亚科的地下鼠结果聚同于同一分支，遗传隔绝图和分子进化树表露，甘肃鼢鼠与高原鼢鼠、盲鼹鼠之间遗传隔绝最小、进化联系迩来，与人进化联系最远。地下鼠和大地鼠EPO基因功效分裂领会表白，她们的EPO基因爆发了功效分裂，公有29位后验几率值胜过0.80的氨基酸酸功效分裂位点，有2位(117Leu，161Val)后验几率值胜过0.90的功效分裂确定位点。甘肃鼢鼠基因采用压力领会表白，EPO基因在进化中重要遭到纯化采用以及中性采用，在进化中莫大顽固。位点模子检验和测定出了3个受正采用效率的氨基酸酸位点，辨别为第11位的亮氨酸、第144位的丙氨酸和152位的脯氨酸(11Leu，144 Ala，152Pro)。从地下鼠和大地鼠EPO基因功效分裂及采用压力领会不妨看出，地下鼠和大地鼠在长久的进化进程中，少许氨基酸酸位点爆发了功效分裂及正采用符合。EPO基因那些氨基酸酸位点是对地下低氧共通生态位的趋同进化，大概是对残酷地下低氧情况符合的分子体制之一，这为接洽低氧符合喂奶众生EPO基因的功效供给了参考，便于进一步接洽其构造与功效的联系及对缺氧的符合与耐受，为临床医术、航天医术、疏通医术以及缺氧惹起的关系病症的普通接洽和调节等上面供给表面按照。要害词  甘肃鼢鼠，EPO，克隆，及时定量RT-PCR

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