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印楝素是从印楝种子中提取出的四环三萜类化合物,它在农业、林业等方面都有很好的生物杀虫作用,被世界所公认[1]。印楝素还有广泛的药用价值,在印楝种子、树叶、茎中多种具有生物活性的物质已经被分离出来。最常见的有:azadirachtin、nimbin、nimbidn、imbidol、nimbinate、ueceretin、salanmin等。它们具有:拒食、生长调节、抗颤栗、抗细菌、抗溃疡、止痛、抗关节炎、抗真菌[2-5]等作用。本文研究印楝素的提取对生物制剂的发展具有一定的参考价值。
(1) 通过准确的实验检测,得到印楝素A的两种鉴定方法:1、紫外可见光检测条件及其紫外可见光检测的标准曲线的绘制,2、高效液相色谱的检测条件及其高效液相色谱检测的标准曲线的绘制。
(2) 利用高效液相色谱检测7种原料(孟加拉果、缅甸果、国产新楝果1、国产新楝果2、国产新楝果3、国产新楝果3核、国产新楝果3肉)的结果显示:缅甸果与孟加拉果中印楝素A的含量不同的原因可能是由于它的独特的大气环境和地理位置差异产生的。国产新楝果3、国产新楝果3核、国产新楝果3肉,它们之间比较可以看出国产新楝果中的印楝素A主要在果核中。
(3) 传统的印楝素萃取方法提取时间长、提取效率低的缺点,且提取后存在废弃溶剂,需要进行后期处理[6-8]。针对这些问题提出了印楝素的双水相纯化技术,该方法是在接近生理环境的体系中进行纯化,不会破坏生物的生活状态,整个操作过程在常温常压下进行,条件温和、设备简单、操作方便,且分离快、回收率高[9]。
本文首先进行了大量的单因素实验,结果表明:印楝素的提取率和使用的料液比、提取时间、无机盐浓度等因素有关。在振荡提取的实验条件下,得到相对合适的提取条件是:无机盐浓度为0.62g/mL,料液比为1:10,提取时间为2h。
通过正交实验的极差分析进行条件的优化,确定了使用双水相纯化技术提取各因素对印楝素提取率的主次顺序为:料液比>提取时间>无机盐浓度,即无机盐0.62g/mL,料液比为1:10、提取时间1.5h,此时印楝素的提取率为1.23%。
(4) 在相同条件下,正交提取、双水相纯化与乙酸乙酯有机溶剂萃取的比较得到:乙酸乙酯萃取效率是正交提取、双水相纯化效率的两倍之多。乙酸乙酯具有很强的针对性,萃取一次就可以得到溶液中90%的有效成分,但是乙酸乙酯对环境的污染较大,后期的废液不易解决,不利于大规模的生产。而双水相纯化在这一方面的优势便凸显出来。为了达到保护环境的要求,采用双水相技术具有一定的意义。
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