免费论文摘要：Sox 9α基因在华夏林蛙中的表白形式及OP对精巢中Sox 9α表白的感化

为商量Sox 9α在华夏林蛙（Rana chensinensis）成体性腺功效的保护中的效率以及辛基酚（Octylphenol, OP）对Sox 9α表白的感化。本接洽开始克隆了华夏林蛙精巢的Sox 9α基因，将其测序截止导出SeqMan序列拼接；辨别用Blast, ORF, SignalP, ProParam, SMART, NPS@, SWISS-MODEL软硬件举行同源性领会，猜测序列的盛开观赏框、旗号肽、卵白分子分量、功效构造域、等电点、卵白质的二级和三级构造。而后，采用两栖和匍匐众生的12个物种举行ClustalW2比对，MEGA5.1树立，领会华夏林蛙Sox 9α基因的进化位置。其次，用Semi-quantity RT-PCR检验和测定Sox 9α在华夏林蛙成体的精巢、卵巢、肾脏、肝脏、脑以及32-46期蝌蚪的表白。结果，将雄性华夏林蛙成体表露于10-5, 10-6, 10-7, 10-8 mol/L OP举行处置，辨别在10、20和30d取其精巢，用Real-time Quantity PCR本领检验和测定Sox 9α在精巢的表白。截止与领会如次：1.在华夏林蛙成体精巢中初次扩大与增加到长为1580bp的Sox 9α cDNA序列，该序列包括一个1449bp的盛开观赏框，其开始暗号子与粗皮蛙(Rana rugosa)的场所普遍。可源代码一个含有482个氨基酸酸的卵白分子，该氨基酸酸序列与粗皮蛙Sox 9α的一致度为97%，且无移码读码局面。与匍匐众生密西西比鳄(Alligator mississippiensis) Sox 9α的一致度为85%，与红耳龟(Trachemys scripta) Sox 9α的一致度为85%。将该序列上传GenBank，其序列号为KC442293。对Sox 9α氨基酸酸序列的构造和功效举行猜测，该序列不生存N-端旗号序列，是一个分外泌卵白，其分子分量为54 kDa，等电点为6.32。序列内除含HMG-box domain (105-175)外，还含有BEN domain (75-147), DnaJ domain (107-152), GIT domain (120-150), CG-1 domain (237-276), HSF domain (135-291), PAH domain (376-414)和DUF1518 (304-354) domain等构造域。卵白质二级构造包括17.39%的α-电钻，5.38%的蔓延链和77.23%的自在弯曲。2. ClustalW2比对并MEGA5.1树立表露，华夏林蛙Sox 9α氨基酸酸序列在HMG-box构造域顽固性较高。所采用的12个物种的进化联系可分为有尾两栖类、无尾两栖类和匍匐类3群。华夏林蛙和粗皮蛙共处一群，二者在进化联系上较为逼近。3. Semi-quantity RT-PCR检验和测定表露，Sox 9α在华夏林蛙的精巢、卵巢、肾脏、肝脏和脑中均有表白，在精巢和卵巢中均明显表白。在32-38期母体，43-45期牝牡个别及46期雌性个别中均有表白。表白Sox 9α大概介入母体的性腺分裂和保护成体性腺的功效。4.将成体雄性林蛙表露OP后，用Q-PCR本领检验和测定精巢中Sox 9α mRNA表露，与比较组比拟，各OP处置组Sox 9α mRNA的表白均明显下调。个中，表露10 d，10-8 mol/L OP组的Sox 9α mRNA发端明显低沉，随后表露鲜明的剂量依附性贬低。表露20 d，除10-8 mol/L OP组外，其余各组Sox 9α mRNA水平衡表露鲜明的剂量依附性增高。表露30 d，跟着OP浓淡的减少，Sox 9α mRNA的表白与OP浓淡之间的联系不顺序。总体表露，OP表露可下调Sox 9α mRNA表白，但Sox 9α mRNA表白低沉的水平与OP浓淡、表露功夫之间联系的顺序性不强。5.原位杂交截止表露，Sox 9α mRNA阴性表白旗号重要生存于林蛙精巢的生精致胞。 要害词: Sox 9α，克隆，华夏林蛙，精巢，辛基酚

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