摘要：CCDC152：一种调节细胞 G1/S 限制点的高尔基体蛋白

媒介：CCDC152 (Coiled-coil Domain Containing Protein 152) 属于含有弯曲电钻（Coiled-coil）构造域卵白家属的分子之一，其含有4个弯曲电钻域，但该卵白的功效未知。在真核底栖生物中，很多卵白质潜心性的彼此效率由特出的domain大概motif所介导，而弯曲电钻即是介导卵白质之间潜心性彼此效率的卵白构造域。含有弯曲电钻构造域的高尔基体卵白常常称为“Golgins”，首先被审定为一组在自己免疫性病症患者的血小板中创造并定坐落高尔基体的卵白。Golgins和高尔基体重组堆放卵白（GRASP）被觉得是产生高尔基体的构造骨子（或Golgi matrix），在高尔基体构造和功效中起着要害效率。连年来接洽创造,高尔基体卵白经过调节和控制细胞周期检查点的关系激酶来调节和控制细胞周期的举行，所以高尔基体也被觉得是细胞周期的“高尔基体检查点”。高尔基体检查点的特性是经过感触高尔基体的完备性而非保守的DNA伤害建设来调节和控制细胞周期的。纵然高尔基体的解聚是怎样调节和控制细胞周期的体制暂时还不是很领会，然而那些创造揭穿细胞器的遗传性和旗号道路共同来安排细胞分割的体制。检查点激酶1（Chk1）/CDC2和pRb（网膜母细胞瘤卵白）是细胞周期检查点调节和控制的要害激酶。CDC2首先在裂殖酵母中被创造，具备丝氨酸/苏氨酸卵白激酶活性。Rb是一种肿瘤控制基因，该基因产品pRb与E2F家属的转录因子彼此效率产生pRb-E2F复合物从而负调节和控制细胞周期的举行。已有接洽表白CDC2不妨盐酸化pRb卵白S807/811位点使其遗失活性，引导E2F家属转录因子的开释，开释的E2Fs贯串到靶DNA并激活DNA的转录。CDC2-pRB-E2F产生一个正反应轮回，但当CDC2卵白T14/Y15位点被盐酸化后，CDC2卵白激酶活性流失，引导pRb-E2F复合物增加，DNA转录遭到控制和细胞周期的阻碍。本接洽创造CCDC152是一个新的高尔基体卵白，而且介入了细胞周期G1/S期的变换。  资料及本领：（1）接洽CCDC152卵白在细胞中的定位：制备293T细胞爬片并恒定，用免疫性构造化学本领领会内源性CCDC152在细胞周期中表白定位及变革；建立CCDC152-YFP黄色荧光卵白融洽表白载体，转染293T细胞，查看外源性CCDC152-YFP在细胞周期中的定位及样式变革。沿用已知的高尔基体标记物黄色荧光卵白融洽表白载体Golgi-YFP动作比较，将Golgi-YFP和CCDC152-YFP辨别转染293T细胞而且用秋水仙素和BFA药物处置，查看CCDC152-YFP和Golgi-YFP在药物处置后的变革。进一步经过干预CCDC152来查看Golgi-YFP变革。  （2）接洽CCDC152对细胞周期的调节和控制效率：将CCDC152表白载体和合成好的干预CCDC152的双链RNA辨别转染293T细胞，经过流式细胞本领接洽过表白和干预CCDC152对细胞周期的感化; 制备293T细胞爬片，而后将CCDC152表白载体和合成CCDC152干预的RNA辨别转染293T细胞，做BrdU的免疫性构造化学领会，经过查看过表白和干预CCDC152后BrdU掺入量变革，来领会CCDC152对细胞周期S期DNA复制的感化。  （3）接洽CCDC152对细胞周期检查点激酶表白的感化：将CCDC152表白载体和合成好的干预CCDC152的双链RNA辨别转染293T细胞，Western Blot检验和测定CCDC152对细胞周克日制点(restriction point)  pRb，CDC2，p53等表白的感化。  截止：  （1）内源性CCDC152的表白跟着细胞周期的举行表露周期性变革：在细胞分割间期，CCDC152的表白呈相似形散布于细胞核周边；跟着细胞加入分割期，CCDC152渐渐弥漫在所有胞浆中；而当细胞加入细胞分割后期，CCDC152的表白从新会合于细胞核周边。其余，外源性CCDC152-YFP的表白与内源性CCDC152表白在细胞周期中变革普遍。秋水仙素和BFA药物处置后CCDC152-YFP的表白表露弥漫,这种变革与药物处置后的Golgi-YFP变革普遍。干预CCDC152后Golgi-YFP的表白表露弥漫。  （2）过表白CCDC152后细胞周期G1期细胞数缩小，而S期的细胞数增加;干预CCDC152后细胞周期G1期和S期细胞数变革不鲜明。BrdU的免疫性构造化学截止表露过表白CCDC152后BrdU掺入DNA的量减少，而干预CCDC152后BrdU掺入DNA的量减少更鲜明。即过表白和干预CCDC152后都引导S期DNA的合成的减少。  （3）CCDC152对细胞周期检查点激酶表白的感化：过表白CCDC152后pRb-S807/811表白上调，即pRb激酶的S807/811位点盐酸化化装巩固，干预CCDC152后pRb激酶的盐酸化化装巩固越发鲜明;而过表白CCDC152后CDC2-Y15表白下调，即CDC2激酶的Y15盐酸化化装缩小，干预CCDC152后CDC2激酶盐酸化化装缩小更鲜明。而p53-S15在过表白和干预CCDC152后变革不鲜明。这表白CCDC152经过调节和控制细胞周期检查点激酶pRb和CDC2的盐酸化化装来调节和控制细胞周期G1/S期的变换。  论断：  （1）CCDC152 是一种高尔基体卵白；  （2）CCDC152 经过调节和控制细胞周期检查点pRb和CDC2激酶的盐酸化修                                饰来调节和控制细胞周期举行；  （3）CCDC152介入细胞周期G1/S变换的调节和控制。  本接洽为高尔基复合体调节和控制细胞周期的假说供给了新的证明。

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