摘要： Brevinin-2家族抗菌肽构效关系及作用机制的初步研究

抗菌肽（Antimicrobialpeptides，AMPs）是一类生存于多种底栖生物天才免疫性体例中，并由一定基因源代码的具备抑菌活性的小分子多肽。在抗生素乱用引导耐酒性题目频发的即日，具有特殊效率机理的两栖类皮肤抗菌肽展示了普遍的运用远景。抗菌肽Brevinin-2CE是从华夏林蛙（Ranachensinensis）皮肤中辨别的自然抗菌肽，全长是37个氨基酸酸，头等构造为：GLLSVFKGVLKTAGKNVAKNVAGSLLDQLKCKISGGC。抗菌肽Brevinin-2Ka是从高原林蛙（Ranakukunoris）皮肤中挑选到的自然抗菌肽，全长为33个氨基酸酸残基，头等构造是：GLLSVFKGVLKTAGKHVAGSLLHQLKCKISGGC。这两种抗菌肽具有Brevinin-2家属抗菌肽的典范个性，不妨控制罕见的革兰氏阴性菌和革兰氏阴性菌。本接洽以Brevinin-2CE（简称B2CE）和Brevinin-2Ka（简称B2Ka）为沙盘，运用底栖生物消息学本领，经过序列截短、单个或多个氨基酸酸替代，对其序列长度、二硫键、电荷数、疏水性、两亲性等特性举行变革，并检验和测定变革肽对细菌、红细胞和真核喂奶众生细胞的活性，接洽Brevinin-2家属抗菌肽构造和活性之间的联系。重要截止如次：1、运用底栖生物消息学本领辨别对B2CE和B2Ka举行了一致的变革，截止为：经过在合成时不加二硫键或是将半胱氨酸替代为构造一致的丝氨酸，安排了B2CE-nonDS、B2CE-C31,37S和B2Ka-nonDS、B2Ka-C27,33S；经过截短B2CE和B2Ka的序列，赢得B2CE-N26、B2-N15和B2Ka-N26、B2-N15；辨别以B2CE-N26和B2Ka-N26为沙盘，经过单个或多个氨基酸酸替代，安排B2CE-N26-V5K、B2CE-N26-G14K、B2CE-N26-V5KG14K和B2Ka-N26-V5K、B2Ka-N26-G14K、B2Ka-N26-V5KG14K，这两组变革肽与沙盘比拟均具备电荷数减少、疏水性贬低、两亲性局部减少的个性；其余，按照电钻轮安排了具备实足亲疏海面的B2CE-N26-N16WA18KG23K和B2Ka-N26-H16WA18KG19K；在接洽组氨酸和赖氨酸在序列中的各别效率时，安排了B2Ka-N26-G14KH-K。2、经过检验和测定最小抑菌浓淡（MIC）领会抗菌肽对细菌的控制效率，截止创造：与原始肽B2CE和B2Ka比拟，缺点和失误二硫键的变革肽对细菌的控制效率没有变革，证明二硫键在Brevinin-2抑菌进程中不表现效率；辨别比拟B2CE、B2CE-N26、B2-N15和B2Ka、B2Ka-N26、B2-N15两组抗菌肽的抑菌活性，创造跟着Brevinin-2序列变短，抑菌活性渐渐贬低；与B2CE-N26比拟，B2CE-N26-V5K的抑菌活性普及了1-8倍，而与B2Ka-N26比拟，B2Ka-N26-V5KG14K的抑菌活性明显地下II降，证明符合地普及电荷数和两亲性、贬低疏水性，利于于普及抑菌活性；B2CE-N26-N16WA18KG23K和B2Ka-N26-H16WA18KG19K对检验和测定的菌株均表露激烈的控制效率，证明两亲性是Brevinin-2表现抑菌效率的要害成分；与B2Ka-N26-G14K比拟，B2Ka-N26-G14KH-K的抑菌活性普及2-6倍，证明赖氨酸比拟于组氨酸利于于普及抑菌活性。3、溶血试验检验和测定截止创造：比拟于B2CE，B2CE-C31,37S的溶血活性普及了2倍，证明二硫键巩固抗菌肽对红细胞的妨害；跟着序列的截短，红细胞对立菌肽敏锐度贬低；在B2CE-N26和B2Ka-N26的变革中，B2CE-N26-N16WA18KG23K和B2Ka-N26-H16WA18KG19K展示了极强的溶血活性，证明两亲性是抗菌肽效率于红细胞的要害成分。4、运用MTT法检验和测定了抗菌肽对肿瘤细胞和平常细胞的细胞毒性，截止创造：与原始肽B2CE和B2Ka比拟，缺点和失误二硫键的变革肽抑肿瘤细胞活性有微弱的贬低，证明二硫键感化抗菌肽防癌活性的表现；辨别比拟B2CE、B2CE-N26、B2-N15和B2Ka、B2Ka-N26、B2-N15两组抗菌肽的防癌活性，表明跟着抗菌肽序列变短，细胞对立菌肽的敏锐度贬低；以B2CE-N26和B2Ka-N26为沙盘的变革肽，其防癌活性均低沉，而B2Ka-N26-H16WA18KG19K的防癌活性明显普及，表明过度地贬低电荷数、普及疏水性和两亲性利于于抗菌肽表现防癌效率；B2Ka-N26-G14KH-K的防癌活性相较于B2Ka-N26-G14K普及了4-5倍，证明赖氨酸比拟于组氨酸利于于普及防癌活性。在之上处事的普通上，咱们又进一步接洽了抗菌肽对细菌的效率体制，亚原子力显微镜及细菌毒性检验和测定截止表明：抗菌肽效率体制各别于保守抗生素，抗菌肽能使细胞膜遭到妨害，以致细胞裂解，进而起到杀菌效率。本课题初次以Brevinin-2家属抗菌肽动作沙盘，安排合成一系列一致物，接洽了该家属的构效联系，并赢得具备运用远景的抗菌肽。本接洽为抗菌肽分子变革、开拓新式抗菌药剂奠定了普通。

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