免费论文摘要：拟黑多刺蚁蜕皮荷尔蒙受体EcR卵白的定位与定量领会及其与雌荷尔蒙关系受体ERR的关系性接洽

       蜕皮荷尔蒙是虫豸体内最要害的荷尔蒙之一，其功效表现由蜕皮荷尔蒙受体(ecdysone receptor, EcR)与超气门卵白(ultraspiracle protein,  USP)构成的异二聚体受体所介导，介入调节和控制虫豸蜕皮、反常、神经体例化装与重塑、免疫性、生殖、滞育、动作、社会性虫豸等第分裂等多种人命震动。雌荷尔蒙关系受体(estrogen-related receptor, ERR)属于孤儿核受体，介入安排果蝇发育进程中糖酵解道路，在新陈代谢调节和控制和成长发育中起要害效率。       拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)是典范的实足反常社会性虫豸，人命周期体验卵、毛蚴、蛹和若虫四个重要发育阶段。若虫各等第间具备精确的社会单干，具备普遍的多态局面和莫大搀杂的神经体例，是接洽社会性虫豸成长发育、心理生物化学的杰出资料。       本接洽以拟黑多刺蚁动作试验资料，经过荧光及时定量RT-PCR、western blot及免疫性构造化学等本领本领对其体内EcR基因在卵白质程度举行了定量与定位表白比拟领会，并运用食品介导的RNAi(RNA interference, RNAi)本领商量了EcR和USP与ERR在卵白质程度的关系性及其在拟黑多刺蚁成长发育中的效率。截止如次：       1. 运用western-blot对EcR卵白在拟黑多刺蚁各别发育阶段、各别等第虫体的表白情景举行定量领会，截止表白EcR卵白在拟黑多刺蚁发育进程中的表白具备功夫奇异性。在反常发育期，EcR卵白在卵期表白最少，一龄毛蚴期表白发端增高，到三龄和四龄毛蚴期表白最高，而蛹期表白有所低沉，这与转录程度的表白基础普遍。在若虫成仙后，EcR卵白在三个等第若虫中表白较三龄和四龄毛蚴明显贬低，三者中雌蚁表白最高，雄蚁次之，兵蚁最少。EcR卵白在各别发育阶段的分别性表白截止提醒其在拟黑多刺蚁各别发育阶段所表现的效率大概各别。       2. 运用免疫性构造化学本领对EcR卵白在拟黑多刺蚁各别等第若虫中的表白举行定位与定量领会，截止表白EcR卵白在拟黑多刺蚁三个等第若虫体内的散布部位较为普遍，且表白程度表露出鲜明的等第与构造分别性。       在脑部，EcR卵白在三个等第的蕈形骸，更加是蕈形骸冠和Kenyon细胞中均有较激烈的阴性表白；雄蚁在视叶、中心复合体和食道下神经节中均有比兵蚁和雌蚁对立鲜明的阴性旗号(P       运用RNAi本领对拟黑多刺蚁一定发育阶段虫体EcR和USP基因举行安静表白，运用qRT-PCR、western blot及免疫性构造化学等本领检验和测定关系基因的表白情景，以商量EcR、USP与ERR的功效关系性，截止如次：     （1）安排引物并经过RT-PCR辨别扩大与增加出了EcR、USP及GFP DNA片断，辨别为451bp、646bp、438bp，并以此为沙盘辨别合成用来RNAi的EcR、USP及GFP dsRNA，并将EcR、USP dsRNA片断用300mM蔗糖溶液辨别稀释至浓淡为15ng/ul和10ng/ul，GFP dsRNA浓淡与EcR和USP dsRNA浓淡沟通。     （2）用饲喂法将dsRNA溶液导出拟黑多刺蚁兵蚁体内，贯串处置12天，每3天对mRNA和卵白质举行一次索取。截止表白，EcR mRNA和卵白质在干预后的第3天、第6天及第12天均展示鲜明的表白下调，而USP mRNA在一切检验和测定点均展示鲜明的表白下调。EcR-RNAi后的第3天和第12天ERR在卵白质程度展示鲜明的下调，而USP-RNAi组仅在干预后的第9天ERR在卵白质程度展示鲜明的下调。那些证明兵蚁体内EcR和USP对ERR的表白均有确定的调节和控制效率，且展现出与发育功夫和干预功效关系。     （3）免疫性组化截止表露，拟黑多刺蚁兵蚁经EcR-RNAi后，EcR卵白在脑部蕈形骸柄、中心复合体及中脑的阴性反馈鲜明贬低，在腹腔的脂肪体中阴性表白也有确定水平的下调；ERR卵白在脑部的Keyon细胞、β叶及中脑的阴性反馈鲜明缩小，在蕈形骸冠和中心复合体中也有确定水平的贬低。那些表白EcR对ERR的表白有安排效率，且具备构造奇异性。     （4）用浸湿法将dsRNA溶液涂于拟黑多刺蚁四龄毛蚴和蛹的表面皮，贯串处置12天，之后对mRNA及卵白质举行索取，截止表白，EcR和USP mRNA均在干预后的四龄毛蚴中展示鲜明的下调，而在蛹期均无鲜明的安静功效。在四龄毛蚴中，EcR-RNAi处置组EcR和ERR在卵白质程度的表白同比较组比拟均无统计学明显性分别变革，这大概与干预功效不及相关，而USP-RNAi处置组ERR在卵白质程度的表白则展示明显的下调，表白在四龄毛蚴中USP对ERR的表白有调节和控制效率。       本接洽初次在卵白质程度对拟黑多刺蚁体内EcR卵白举行了体例的定量与定位接洽，同声胜利地运用蔗糖溶液介导的RNAi商量了EcR、USP与ERR的表白关系性及其对拟黑多刺蚁成长发育的安排效率，接洽截止可为拟黑多刺蚁及其它虫豸的心理生物化学接洽供给表面普通。

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