免费论文摘要：丹参迷迭香酸合酶基因（SmRAS）奇异性安静对酚酸类因素合成的感化

      丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是唇形科有年生药用植被，普遍散布于我国民代表大会局部地域。丹参的重要药用部位为根和根茎，动作我国要害的保守国药，在临床上有长久的用药汗青。在保守用药中，丹参多被用来调节心血管病症、百般炎症以及月信不调等。新颖药道学接洽证明，丹参的重要药理活性因素可分为本质各别的两大类：一类为脂溶性的丹参酮类物资，囊括丹参酮IIA和隐丹参酮等；另一类为水溶性的酚酸类复合物，囊括丹酚酸B和迷迭香酸等。已有接洽表白，丹参酚酸类物资由酪氨酸和苯丙烷类两条新陈代谢道路共通介入合成，中央产品迷迭香酸是合成丹酚酸B的中心前体。暂时已知新陈代谢道路上的多个要害酶基因被克隆和接洽，但对于迷迭香酸合酶（SmRAS）的接洽还较少。本试验以丹参迷迭香酸合酶基因（SmRAS）为接洽东西，建立人为miRNA(amiRNA)表白载体，对SmRAS基因举行奇异性干预，进而对该基因的功效举行发端接洽。商量迷迭香酸合酶基因与丹参酚酸类新陈代谢物合成之间的关系性，为证明丹参中重要水溶性活性因素合成的分子体制供给按照，同声也为运用基因工程对丹参品德举行变革奠定普通。重要接洽实质及截止如次：1.采用SmRAS基因的非顽固地区为靶位点，运用WMD3(Web microRNA designer)软硬件安排靶向SmRAS的amiRNAs序列，而后以拟南芥MIR319a前体序名列骨子，运用臃肿PCR(over-lapping PCR)本领置换MIR319a的前体序列中的miR319a/miR319a*局部，赢得amiRNA前体序列；再将其插入到pCambia1302载体中的35S启用子和Nos中断子之间，建立获得奇异性安静SmRAS的amiRNA过表白植被载体。2.辨别索取野生丹参根、茎、叶的RNA并回转录为cDNA，运用及时定量PCR本领接洽SmRAS基因在各别构造中的表白丰度。截止表白，SmRAS基因在丹参的根、茎、叶等构造中均有表白，但在根中表白丰度最高，茎中次之，叶中含量最低。3.运用叶盘变化法感化野生丹参叶片，经DNA和RNA程度挑选检验和测定，获得9个成长杰出的阴性转基因株系，运用半定量PCR、PCR-Southern blotting和及时荧光定量本领对阴性株系举行检验和测定。截止表白，转基因阴性株系中SmRAS基因表白量明显低于野生比较株系，而amiRNA表白量均明显高于比较，证明本试验建立的amiRNA前体序列不妨在丹参细胞内被精确的辨别、加工和最后实行amiRNA的表白，进而到达了奇异性安静靶基因的功效。其次，对转基因株系中SmRAS在各别构造中的表白形式领会创造，SmRAS在转基因株系的各别构造中的表白形式与野生株系相普遍，且表白量均低于野生丹参各构造中的表白量。4.对干波及比较株系的构造培植滴定管苗香港中华总商会酚酸含量检验和测定创造，三个被检的干预株系香港中华总商会酚酸含量均低于比较株系。3#、6#、14#株系的总酚酸含量辨别为比较的45.34%、76.22%和28.48%。5.运用HPLC本领检验和测定变化丹参的60d龄实生苗的根中迷迭香酸和丹酚酸B的含量。截止表白，三个转基因株系较比较株系的迷迭香酸和丹酚酸B的含量均有各别水平的贬低，个中14#株系中迷迭香酸和丹酚酸B的含量贬低最为鲜明，仅为比较的49.80%和32.95%。6.对阴性转基因株系的表型举行查看，与比较丹参比拟，SmRAS基因干预植株展现出身根功夫减速、多须根而直根较少，根外表脸色较浅，茎秆分节较多且较纤悉。论断：本接洽建立amiRNA表白载体介导SmRAS基因奇异性安静，赢得阴性转基因株系。发端商量丹参体内迷迭香酸合酶基因与酚酸类物资合成之间的要害关系性。为进一步运用基因工程对丹参举行品德变革奠定确定的表面普通。

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