免费论文摘要：丝氨酸卵白酶高活性菌株选择和培育及其生防效率接洽

因为耕大地积的缩小和养护培植的赶快兴盛，农业消费中农作物重茬特殊一致。农作物重茬时土传真菌病虫害和根结线虫妨害往往相伴爆发，使熏染和妨害加剧。挑选和选择和培育对植被病原真菌和根结线虫高效、对情况安定的生防菌株，沿用进步的发酵工艺制备出高含菌量的生防菌剂已变成高效农业可连接兴盛中一项特殊急迫的工作。丝氨酸卵白酶是一类活性重心含有丝氨酸的卵白酶。已有接洽创造，产丝氨酸卵白酶的真菌能妨害根结线虫的体壁和卵壳，对根结线虫有较好的生防功效。芽胞杆菌对植被病原真菌的生防功效已有较多通讯，但产丝氨酸卵白酶芽胞杆菌对根结线虫的生防效率通讯很少。本接洽的手段是挑选产丝氨酸卵白酶的芽胞杆菌，查看其对植被病原真菌和根结线虫的生防功效，采用酶活较高的菌株动作动身菌株，商量其培植前提和产酶前提，经过诱变和原生质体融洽本领，赢得酶活普及的菌株。重要接洽实质和截止如次：（1）从豆豉、腐乳、有年重茬大棚培植的西红柿根际泥土等试验资料中辨别到多株卵白酶爆发菌，用丝氨酸卵白酶的特出底物BApNA和奇异性控制剂PMSF决定产丝氨酸卵白酶菌株，赢得丝氨酸卵白酶爆发菌株SNUB18和SNUB19，PMSF对SNUB18粗酶液的控制率为77.86%，对SNUB19粗酶液的控制率为91.20%。按照样式特性、心理生物化学个性和16S rDNA比对领会对两个菌株举行审定，截止菌株SNUB18为黄色单胞菌(Xanthomonas campestris)，菌株SNUB19为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。因为生防菌剂诉求非致病性、生存期长等特性，采用枯草芽胞杆菌SNUB19动作后续接洽的试验菌株。（2）用周旋法、抑菌圈法和液体振动培植法查看SNUB19抗植被病原真菌的效率，创造SNUB19的发酵上清液对玉蜀黍大斑病原菌PF3、西红柿灰霉病原菌PF4、葡萄炭疽病原菌PF5和辣子炭疽病原菌PF6等植被病原真菌有明显的控制效率，可控制尖孢镰刀菌孢子萌生、菌丝成长。（3）用96孔板法查看抗线虫效率，创造枯草芽胞杆菌SNUB19的无菌溶液对南边根结线虫二龄毛蚴有较强的杀虫效力。（4）沿用L9(34)正交表安排试验，对枯草芽胞杆菌SNUB19的产酶培植基配方举行了优化。优化后的培植基构成为(g/L)：胡椒粉40，花生饼粉 10，麸皮10，Na2HPO4 4，KH2PO4 0.30，Na2CO3 1.50。培植基优化后，酶生机为132.17U，比优化基础高58.63%。（5）枯草芽胞杆菌SNUB19的丝氨酸卵白酶的最适温度为40℃，高于50℃时，酶生机低沉较快。酶的最适pH为8.0，在 pH7～8之间酶较宁静，pH高于8.5时酶生机低沉。（6）商量紫外光和亚硝基胍对枯草芽胞杆菌SNUB19诱变效力，创造紫外光对枯草芽胞杆菌SNUB19举行诱变时正变率高，变异幅度大。用UV对枯草芽胞杆菌SNUB19举行诱变，最后挑选到渐变株U-3-1，丝氨酸卵白酶活为184.89U，比动身菌株SNUB19普及了29.06%。再将U-3-1用NTG诱变，挑选到渐变株N-3-1，丝氨酸卵白酶酶生机为215.78U，比U-3-1普及50.35%。（7）用紫外光对枯草芽胞杆菌SNUB19举行诱变，以含高于致死浓淡的链霉素、地霉素琼脂培植基枯燥举行初筛，经复筛，赢得了酶活性普及且具备抗酒性的渐变株，个中抗地霉素渐变株P-1-5，丝氨酸卵白酶生机为174.84U，是动身菌株SNUB19的1.29；抗链霉素渐变株S-2-2，丝氨酸卵白酶生机为167.26U，比动身菌SNUB19普及23.66%。（8）将赢得的高酶活渐变株N-3-1和抗酒性渐变株P-1-5、S-2-2经原生质体融洽，挑选到酶活性普及且带有抗酒性标志的融洽子H-3-11，酶生机为237.67U，是动身菌株的1.65倍。经传代考查，证明融洽子遗传个性宁静。正文的革新之处在乎：（1）赢得了产丝氨酸卵白酶的枯草芽胞杆菌SNUB19，证明SNUB19对植被病原真菌和根结线虫都有较好的生防效率。产丝氨酸卵白酶枯草芽胞杆菌对根结线虫毛蚴和虫卵有杀灭效率为首次创造。（2）经过诱变和原生质体融洽赢得了丝氨酸卵白酶活性明显普及的渐变株和融洽子。因为功夫控制，本接洽中多亲本原生质体融洽惟有一轮，如再举行多亲本递进式原生质体融洽，有大概获得酶活性进一步普及的改选菌株。其余，高酶活菌株对大田农作物植被病原真菌和根结线虫的生防功效也有待于查看。 

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