免费论文摘要：低氧应激下甘肃鼢鼠脑和肝中MsrA的表白及其基因克隆与底栖生物消息学领会

甘肃鼢鼠( Myospalax cansus ) 从属啮齿目(Rodentia) 、鼹形鼠科(Spalacidae)、鼢鼠亚科(Myospalacinae) 、鼢鼠属( Myospalax)，重要散布于黄土高原，终身营庄重地下洞道生存，是一种典范的地下鼠。因为甘肃鼢鼠世代生存于低氧、高中二年级氧化碳的洞道情况，为符合这种特出情况，产生了一系列符合地下低氧、高中二年级氧化碳的心理生物化学体制，变成接洽低氧符合体制的理念形式众生。甲硫氨酸硫氧化学物理恢复酶（MsrA）是一种较小的胞质内酶，在底栖生物体内一致生存。MsrA是体内抗氧化体例中的要害构成局部，其重要功效是建设卵白质和废除活性氧，使肌体功效卵白免受活性氧的氧化伤害，进而保护平常的底栖生物活性。对各别物种的接洽均证明，MsrA具备巩固细胞或底栖生物抗氧化应激的效率，各别物种间MsrA基因具备莫大同源性，各别种属的MsrA氨基酸酸序列顽固。MsrA生存于喂奶众生一切构造，但在各别的构造中表白量各别。本接洽以甘肃鼢鼠为接洽东西，旨在发端商量抗氧化体例在众生低氧符合中的效率。应用荧光及时定量PCR本领对甘肃鼢鼠和SD大鼠在各别低氧前提下脑和肝构造中MsrA mRNA表白量举行比拟；经过RT-PCR本领克隆甘肃鼢鼠MsrA基因cDNA序列，猜测氨基酸酸序列；应用底栖生物消息学对甘肃鼢鼠MsrA卵白序列举行领会。接洽截止如次：1. 应用荧光及时定量PCR比拟甘肃鼢鼠和SD大鼠在各别低氧前提下，脑和肝构造中MsrA mRNA的表白。截止表白，甘肃鼢鼠和SD大鼠肝中慢性低氧组对立常氧比较组表白极明显减少，耐性低氧组对立常氧组无明显分别，与慢性低氧组比拟，表白极明显低沉，证明慢性低氧刺激肝构造 MsrA mRNA 表白。SD大鼠与甘肃鼢鼠比拟，慢性低氧对立常氧组表白量减少更明显，证明SD大鼠对慢性低氧刺激反馈更激烈，大概是由于甘肃鼢鼠长久符合地下低氧情况，肝脏对外界氧压贬低的刺激比拟SD大鼠不敏锐，具备杰出的低氧耐受力。在脑构造中，甘肃鼢鼠慢性低氧组MsrA mRNA表白对立常氧组无明显分别，耐性低氧组对立常氧组和慢性低氧组均极明显减少。证明慢性低氧处置不许刺激其脑构造MsrA mRNA表白，肌体大概经过其它的心理反馈符合重要缺氧情况，脑构造MsrA mRNA 表白上调是甘肃鼢鼠符合耐性低氧情况的展现，估计这是甘肃鼢鼠抗单薄、维持长命特性的体制之一。SD大鼠脑构造中MsrA mRNA表白在三组处置组间均无明显分别。估计SD大鼠脑细胞抗氧化本领有限，慢性缺氧已对其肌体形成重要伤害，肌体不许灵验地建设那些伤害。其余，两种众生在百般处置前提下，脑构造表白量均极明显高于肝构造，展现出鲜明的构造奇异性，证明MsrA在脑构造中有特出的心理功效。2. 甘肃鼢鼠MsrA基因cDNA的CDS区序列全长699bp，包括一个盛开观赏框，源代码232个氨基酸酸。运用NCBI中BLAST对其序列同源性举行检验和测定，创造所测序列与伽利尔盲鼹鼠（Spalax galili）同源性最高，91%，与序列处置在线东西包(SMS) ORF搜索器搜索截止普遍。可发端判决，该序名列甘肃鼢鼠MsrA基因全长cDNA序列，能源代码完备MsrA卵白质序列，可举行后续试验及数据领会。3. 底栖生物消息学领会MsrA卵白序列。沿用ProtParam对MsrA卵白质生化本质举行领会，MsrA卵白分子式C1145H1764 N328O326S10，分子品质约25.7kDa，表面等电点pI=9.33，共囊括3573个亚原子，按照Guruprasad本领领会，MsrA卵白为宁静卵白；运用软硬件signalP-3.0server对MsrA卵白质举行旗号肽领会，表露MsrA卵白无旗号肽，为分外泌卵白质；TMpred对甘肃鼢鼠MsrA跨膜辨别析表白，甘肃鼢鼠MsrA卵白无跨膜区；TargetP 1.1对卵白亚细胞定位举行猜测，表露该卵白渗透道路为M型，定位线粒体；经过ProtScale，并沿用Hphob. /Kyte & Doolittle本领计划疏水性，创造所有卵白质中疏水性最大值是1.900，最小值是-2.500； COILS Server猜测该卵白弯曲电钻，创造甘肃鼢鼠MsrA卵白含一个典范弯曲电钻构造；CDD领会甘肃鼢鼠MsrA序列顽固构造域，表露甘肃鼢鼠MsrA具备盐酸核酮糖激酶（PRK）顽固构造域，属于甲硫氨酸硫氧化学物理恢复酶（Peptide Methionine Sulfoxide Reductase，PMSR）超家属。PredictProtein领会MsrA卵白功效基序，创造该卵白序列有多个功效位点，囊括2个卵白激酶C盐酸化位点、2个酪卵白激酶Ⅱ盐酸化位点、7个N端糖基化位点；二级构造重要以α-电钻和不准则弯曲为主，MsrA卵白是mixed型；运用SwissModel 全机动形式 ( Automated Mode) 举行三级构造猜测，表露甘肃鼢鼠MsrA卵白最配合沙盘是1fvaB，最好比对地区坐落序列第28-227位氨基酸酸残基，序列普遍性83.58%，e值2.07e-94。运用ClustalX将甘肃鼢鼠MsrA基因序列与裸鼢鼠（Heterocephalus glaber）、人（Homo sapiens）、鼠兔（Ochotona princeps）、亚马逊灰鼠猴（Saimiri boliviensis）、突尼斯欧洲跳鼠（Jaculus jaculus）、伽利尔盲鼹鼠（spalax galili）、小鼠（Mus musculus）、大家鼠（Rattus norvegicus ）和草地田鼠(Microtus ochrogaster)相映序列举行比较，创造甘肃鼢鼠MsrA基因与伽利尔盲鼹鼠同源性最高，91%，与突尼斯欧洲跳鼠和草地田鼠同源性86%，与人、亚马逊灰鼠猴和小鼠85%，与裸鼢鼠、鼠兔及大家鼠同源性84%，证明各物种间MsrA基因进化较顽固，序列较一致。甘肃鼢鼠MsrA氨基酸酸序列与伽利尔盲鼹鼠同源性最高，92%，与鼠兔、突尼斯欧洲跳鼠、亚马逊灰鼠猴、草地田鼠、人、裸鼢鼠、大家鼠及小鼠同源性辨别是88%、85%、83%、83%、81%、81%、81%及80%。MsrA进化树表白，甘肃鼢鼠MsrA与伽利尔盲鼹鼠MsrA遗传隔绝最小，进化联系迩来，与其余物种遗传隔绝对立较远，与大家鼠遗传隔绝最远。应用DIVERG 3.0软硬件计划地下鼠与大地鼠MsrA功效分裂系数，θ=0.8144，证明地下鼠与大地鼠MsrA生存鲜明功效分裂。表面上猜测要害位点，公有48个大概功效分裂确定位点，个中QK﹥0.9的位点公有48位，QK﹥0.95位点有4位。沿用PAML软硬件，对甘肃鼢鼠MsrA基因源代码序列举行采用压力领会，猜测出3个正采用位点：第15位半胱氨酸、第16位精氨酸、第163位天冬氨酸。甘肃鼢鼠MsrA基因在长久进化进程中，爆发了功效分裂和正采用符合，这是其对地下低氧高中二年级氧化碳共通生态位的趋同进化，估计是符合地下洞道低氧情况的分子体制之一。

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