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手段:血小板膜糖卵白Ib-IX(Glycoprotein Ib-IX, GPIb-IX)复合物对血小板止血功效的表现具备要害意旨。正文旨在创造表白血小板膜糖卵白GPIb-IX复合物的华夏仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞野生型和渐变型细胞模子,接洽商量细胞株创造的本领及其对接洽GPIb-IX复合物功效的运用价格。本领:抽提表白GPIb alpha基因的野生型和渐变型表白质粒,并举行审定。将表白GPIb alpha、GPIb beta和GPIX基因的三种质粒共转染CHO细胞,经过Western Blotting和流式细胞仪检验和测定细胞转染截止,经过细胞分选搜集阴性细胞。经过免疫性共积淀检验和测定CHO细胞株中原野战军生型和渐变型GPIb alpha与14-3-3ζ贯串的情景,经过激光共聚焦显微镜查看野生型和渐变型GPIb alpha在CHO细胞株中的散布情景。截止:质粒审定截止表白,表白质粒中包括野生型和渐变型GPIb alpha基因,Western Blotting和流式细胞仪检验和测定截止表明,咱们胜利创造了表白野生型(Ib9)和渐变型(△551)血小板膜糖卵白GPIb-IX复合物的CHO细胞模子。免疫性共积淀截止表露Ib9细胞株中GPIb alpha不妨与14-3-3ζ卵白贯串,而△551细胞株中GPIb alpha不许和14-3-3ζ卵白贯串。在包被有VWF的基质外表,botrocetin刺激的△551细胞铺展范畴比Ib9细胞表面积更大。论断:胜利建立表白血小板膜糖卵白GPIb-IX复合物的细胞模子。GPIb alpha 膜内C端551位点之后氨基酸酸的缺点和失误会引导GPIb alpha不与14-3-3ζ卵白贯串,而减少VWF与GPIb-IX复合物的贯串。截止表白,咱们创造的细胞株可用来GPIb-IX心理功效的接洽。
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