免费论文摘要：卵白激酶A对血小板心理功效的调节和控制效率及血小板糖卵白GPIb-IX复合物全党外接洽模子的创造

糖卵白（Glycoprotein，GP）Ibα表白于血小板质膜外表，其膜外N端序列含有von Willebrand因子（von Willebrand factor，VWF）等配体的贯串位点。在高剪切前提下，GPIbα与表露于受损血管内皮外表的VWF贯串使得血小板粘附在受损血管壁产生血栓，起到止血效率。所以GPIbα的膜外功效区的酶切与血栓产生和止血精细关系。积聚的血小板或血小板遭到刺激后，GPIbα爆发外功效域酶切，然而个中的体制未明。在本接洽中，咱们商量了卵白激酶A (protein kinase A，PKA)在GPIbα酶切中的效率，截止表白长功夫控制血小板卵白激酶A不妨引导解离素-非金属卵白酶（a disintegrin and metalloproteinase, ADAM）17依附的GPIbα酶切。血小板与PKA控制剂（H89)长功夫温育引导GPIbα剂量依附性的被酶切。其酶切爆发的水平鲜明大于钙离子载体或α－凝血酶介导的GPIbα酶切，但是前者血小板外表P-采用素的表白却鲜明低于后者。PKA控制开辟的血小板GPIbα酶切不妨被PKA激活剂（forskolin)回转，而且不妨被膜透过性calpain控制剂局部控制。非金属卵白酶控制剂GM6001或EDTA不妨实足控制H89开辟的GPIbα酶切，表白此前提下的酶切依附于非金属卵白酶。功夫依附试验表白酶切发端于血小板与PKA控制剂温育10秒钟后，并且在30秒钟时水平到达最大。遭到PKA控制剂长功夫处置的血小板，其botrocetin开辟的会合功效以及剪切力开辟的VWF粘附功效鲜明贬低。本接洽对于揭穿血小板功效的负调节和控制体制具备要害意旨。除去GPIbα膜外功效域酶切，舆论还阐明了PKA在血小板促凝活性中的调节和控制效率。血小板活化引导的微颗粒（microparticle, MP）开释以及磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine, PS）外翻不妨为凝血酶的产生供给催化外表，所以被设置为血小板的促凝活性。有接洽通讯升cAMP试药不妨控制冲动剂开辟的血小板微颗粒开释和PS外翻，然而个中的体制未明。本接洽表露，控制血小板PKA普通活性不妨引导血小板微颗粒产生和PS开释。升高胞内cAMP浓淡的试药（forskolin)不妨控制凝血酶加胶原开辟的微颗粒产生和PS表露，同声不妨鲜明减低钙离子载体开辟的微颗粒开释。而且PKA控制剂H89不妨回转forskolin对冲动剂开辟的微颗粒开释和PS表露。PKA控制剂开辟的MP产生不妨被calpain控制剂剂量依附的减低。而且forskolin不妨实足控制凝血酶加胶原开辟的calpain活化。所以，PKA不妨调节和控制血小板的促凝活性，而且PKA控制开辟的微颗粒开释依附于calpain的激活。GPIb-IX复合物表白于血小板质膜外表，经过开始血小板在受损血管壁上的粘附而介入血栓产生和止血。相关GPIb-IX的接洽截止大普遍径直来自于血小板或外源表白GPIb-IX复合物的细胞，暂时为止还没有全党外形式膜体例不妨用来该复合物构造和功效的接洽。磷脂双层纳米盘由第一小学块磷脂双层以及包袱在磷脂外侧的膜支架卵白（membrane scaffold protein，MSP）构成，是暂时用来膜卵白接洽的格外具备吸吸力的形式膜。所以，本接洽从人血小板中纯化出GPIb-IX复合物，将其重组于磷脂双层纳米盘，并检验和测定其配体贯串功效。纯化的GPIb-IX复合物与MSP及磷脂以确定比率搀和，组建后由分子筛层析柱领会和辨别。GPIb－IX与MSP同声洗脱表白组建的胜利。重组于纳米盘的GPIb-IX复合物不妨贯串多种构像敏锐抗原，并以0.73 ± 0.07 nM的亲和力在botrocetin生存的前提下与VWF贯串。Ram.1是抗GPIbβ膜外构造域的单克隆抗原，并不妨控制血小板和转染了GPIb-IX复合物的细胞的VWF配体贯串功效，提醒GPIbβ的膜外构造域大概径直介入GPIbα的配体贯串功效。咱们用这一全党外膜体例考证这个假如。截止表白固然Ram.1不妨与重组于纳米盘的GPIb-IX复合物贯串，然而对VWF的贯串功效实足没有感化。并且，重组于纳米盘的GPIb-IX复合物与GPIbα的片断glycocalicin具备沟通的VWF贯串功效。所以，重组于磷脂双层纳米盘的GPIb-IX复合物具备平常的配体贯串功效。而且从这一全党外模子获得的截止提醒，血小板或细胞内Ram.1对VWF贯串功效的控制效率并不径直依附于GPIbβ的膜外构造域。

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